【摘 要】
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目的 探讨miR-16-5p对缺氧复氧诱导的大鼠正常肝细胞系BRL-3A焦亡的作用以及作用机制.方法 通过细胞缺氧复氧的方法构建肝缺血再灌注损伤(HIRI)的体外模型,通过流式细胞术检测细胞焦亡率;通过荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测miR-16-5p的表达水平;运用miR-16-5p mimic在细胞中过表达miR-16-5p并研究miR-16-5p对细胞焦亡的影响;通过蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的蛋白表达水平;通过生物信
【机 构】
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西南医科大学附属中医医院肝胆外科,四川 泸州 646000
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目的 探讨miR-16-5p对缺氧复氧诱导的大鼠正常肝细胞系BRL-3A焦亡的作用以及作用机制.方法 通过细胞缺氧复氧的方法构建肝缺血再灌注损伤(HIRI)的体外模型,通过流式细胞术检测细胞焦亡率;通过荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测miR-16-5p的表达水平;运用miR-16-5p mimic在细胞中过表达miR-16-5p并研究miR-16-5p对细胞焦亡的影响;通过蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的蛋白表达水平;通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验预测并鉴定miR-16-5p与NLRP1的靶向关系;通过过表达和干扰NLRP1,研究NLRP1及miR-16-5p/NLRP1轴对细胞焦亡的影响.结果 与空白对照组相比,模型组焦亡率极显著上升(P<0.01),miR-16-5p表达量显著降低(P<0.05).过表达miR-16-5p极显著抑制细胞焦亡(P<0.01)并抑制焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的表达(P<0.01或P<0.05).双荧光素酶报告基因实验显示NLRP1是miR-16-5p的靶基因,过表达miR-16-5p显著降低了NLRP1的mRNA和蛋白水平(P<0.01或P<0.05).此外,过表达NLRP1逆转了miR-16-5p对细胞焦亡的抑制作用(P<0.01)和对caspase1、IL-1β、IL-18表达的抑制作用(P<0.01或P<0.05).结论 MiR-16-5p通过靶向NLRP1来抑制caspase1、IL-1β、IL-18的表达,从而改善缺氧复氧引起的BRL-3A细胞焦亡.
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综述了皮肤腐蚀和皮肤刺激替代试验的发展,介绍了最近被列入《全球化学品统一分类和标签制度(全球统一制度)》(Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals,GHS)的试验和评估综合策略(Integrated Approach on Testing and Assessment,IATA).重点讨论了各种替代试验的原理、方法和适用范围,详细分析了各种替代试验方法在该策略应用中的优势和局限,为今后有效利用各种替代试验
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