【摘 要】
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钙调神经磷酸酶(Calcineurin, CN)是唯一的Ca2+/钙调素(Camodulin, CaM)依赖的蛋白磷酸酶, 由催化亚基A (CNA, 61 ku)和调节亚基B (CNB, 19 ku) 1∶1组成. 用PCR方法构建了仅
【机 构】
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北京师范大学生命科学学院生物化学及分子生物学系,北京,100875北京师范大学生命科学学院生物化学及分子生物学系,北京,100875;中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室, 北京 1001
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钙调神经磷酸酶(Calcineurin, CN)是唯一的Ca2+/钙调素(Camodulin, CaM)依赖的蛋白磷酸酶, 由催化亚基A (CNA, 61 ku)和调节亚基B (CNB, 19 ku) 1∶1组成. 用PCR方法构建了仅含CNA催化结构域的编码区cDNA序列. 经在E.coli中诱导表达, 纯化, 制备了CNA催化结构域多肽. 以PNPP为底物, 研究了其磷酸酶活力. 结果表明, 在有CaM 和CNB时, 其活性为CNA活性的20倍. CNA催化结构域多肽的最适反应温度为40℃, 其最适反应pH值为8.0. 不同离子对其活性的影响为: Mn2+仍为其强激活剂, 但CNA催化结构域多肽不再受Ca2+的调节. 在6 mmol/L Mg2+存在下, 加Ca2+或EGTA, 催化结构域多肽的活性相同.
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