【摘 要】
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本研究旨在获得高效特异性的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3(P80)非结构蛋白的纳米抗体.用BVDV灭活疫苗免疫羊驼,测得抗体效价后分离全血中的淋巴细胞.通过噬菌体展示技术构建羊
【机 构】
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石河子大学动物科技学院,石河子832000;宁夏大学生命科学学院,银川750021
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本研究旨在获得高效特异性的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3(P80)非结构蛋白的纳米抗体.用BVDV灭活疫苗免疫羊驼,测得抗体效价后分离全血中的淋巴细胞.通过噬菌体展示技术构建羊驼重链抗体可变区噬菌体展示文库.经过连续3次吸附-洗脱-扩增的生物筛淘,从中挑选出与BVDV-NS3蛋白结合的噬菌体.对经菌液PCR、琼脂糖凝胶电泳鉴定到的单域抗体(VHH)克隆进行基因测序和同源性比对.用ELISA方法验证筛选出的纳米抗体的反应原性,找到与BVDV-NS3蛋白亲和力高的纳米抗体.结果表明,获得插入率为92.8％、库容为1.84×1014 CFU/mL的噬菌体展示文库.ELISA结果和氨基酸序列分析显示,成功得到1条与BVDV-NS3蛋白具有良好反应性且与VHH同源性较高的纳米抗体序列.本研究利用大肠杆菌成功表达BVDV-NS3抗原蛋白,建立BVDV纳米抗体噬菌体展示文库,筛选到针对BVDV重要抗原蛋白相应的纳米抗体且与VHH同源性较高.试验结果为牛病毒性腹泻/黏膜病的防控、诊断、治疗及纳米抗体药物的研制提供参考.
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