【摘 要】
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目的研究栀子苷（GEN）对结直肠癌（CRC）细胞增殖和凋亡的影响,探讨其潜在作用机制。方法使用MTT测定不同浓度（0～200μM）GEN对不同CRC细胞的抗增殖作用,筛选后续实验细胞及药物浓度。SW-480细胞经GEN处理后,流式细胞术检测细胞凋亡及周期,采用蛋白质印迹法检测凋亡和周期相关蛋白和Akt/MDM2/p53蛋白表达。建立稳定的AKT基因敲低细胞,MTT测定细胞增殖,免疫荧光法检测MDM
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目的研究栀子苷（GEN）对结直肠癌（CRC）细胞增殖和凋亡的影响,探讨其潜在作用机制。方法使用MTT测定不同浓度（0～200μM）GEN对不同CRC细胞的抗增殖作用,筛选后续实验细胞及药物浓度。SW-480细胞经GEN处理后,流式细胞术检测细胞凋亡及周期,采用蛋白质印迹法检测凋亡和周期相关蛋白和Akt/MDM2/p53蛋白表达。建立稳定的AKT基因敲低细胞,MTT测定细胞增殖,免疫荧光法检测MDM2/p53表达。结果 GEN作用24h和48h后,CRC细胞增殖受到抑制,呈时间和剂量依赖性（P均<0.05）,而在该浓度范围内对正常细胞无显著毒性。与0μM GEN处理组比较,GEN（50、100、150μM）处理48h后,凋亡细胞百分率[（22.19±0.55）%、（48.57±0.57）%、（52.45±1.29）%比（10.44±0.48）%]、凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2蛋白表达[（1.31±0.05）、（3.36±0.07）、（5.34±0.13）比（1.02±0.06）,P均<0.05]显著增加,细胞周期阻滞于G2-M期[（17.81±0.76）%、（19.65±0.89）%比（13.48±0.3）%,P均<0.05],细胞周期蛋白cyclin B1表达[（0.77±0.08）、（0.42±0.11）比（1.07±0.08）,P均<0.05]下降,且呈剂量依赖性（P<0.05）。此外,GEN下调Akt[（0.84±0.04）、（0.67±0.04）、（0.59±0.09）比（1.00±0.02）,P均<0.05]和MDM2蛋白[（0.64±0.06）、（0.45±0.08）、（0.27±0.06）比（1.01±0.02）,P均<0.05]表达,并激活p53蛋白表达[（1.28±0.04）、（1.48±0.06）、（1.81±0.10）比（1.02±0.03）],而Akt敲低后细胞OD值在48h[（0.24±0.04）比（0.47±0.03）]和72h[（0.28±0.02）比（0.63±0.04）,P均<0.05]下降,GEN处理无法进一步抑制sh RNA-AKT1/2细胞增殖能力,Akt敲低后MDM2被抑制,而p53被激活。结论 GEN抑制CRC细胞增殖和诱导G2/M期阻滞和凋亡,其作用机制可能通过AKT/MDM2/p53途径实现。
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