【摘 要】
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双功能酶AAC（6′）-APH（2″）是一种重要的氨基糖苷类抗生素钝化酶,从临床分离出的6株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的总DNA中克隆得到AAC（6′）-APH（2″）基因,将该基因插入质粒pET-28a
【机 构】
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上海师范大学生命与环境科学学院,上海医药工业研究院生物部
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(30801449);国家“重大新药创制”科技重大专项项目(2009ZX09301-007);上海市自然科学基金项目(09ZR1430800)
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双功能酶AAC（6′）-APH（2″）是一种重要的氨基糖苷类抗生素钝化酶,从临床分离出的6株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的总DNA中克隆得到AAC（6′）-APH（2″）基因,将该基因插入质粒pET-28a中构建表达载体,然后将该重组质粒转入大肠杆菌BL21进行异源表达,在IPTG的诱导下产生大量可溶性目标重组蛋白,该重组蛋白经亲和层析分离纯化,SDS-PAGE鉴定纯度大于90%;建立了此双功能酶的体外测活方法,为建立氨基糖苷类抗生素双功能酶抑制剂筛选模型奠定基础.
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