【摘 要】
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目的应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库,克隆XTP3反式激活相关基因.方法以XTP3表达质粒pcDNA3.1(-)-XTP3转染HepG2细胞
【机 构】
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100054,北京地坛医院肝病二科,河南安阳肝胆病医院
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目的应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库,克隆XTP3反式激活相关基因.方法以XTP3表达质粒pcDNA3.1(-)-XTP3转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆P
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