【摘 要】
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目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific protease 22,USP22)对入神经母细胞瘤细胞增殖的影响和作用机制.方法 合成USP22 siRNA及阴性对照siRNA(
【机 构】
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哈尔滨市儿童医院普外二科,黑龙江哈尔滨,150010;哈尔滨医科大学附属肿瘤医院结直肠外科,黑龙江哈尔滨,150081
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目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific protease 22,USP22)对入神经母细胞瘤细胞增殖的影响和作用机制.方法 合成USP22 siRNA及阴性对照siRNA(control siRNA),用脂质体Lipofectamine 2000转染至人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞和SK-NSH细胞,且设立阴性对照组和实验组.通过Western blot法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组神经母细胞瘤细胞的USP22的蛋白表达和mRNA表达水平的变化.采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测USP22siRNA对两组神经母细胞瘤细胞的增殖抑制率.通过原位凋亡TUNEL法检测USP22 siRNA对两组神经母细胞瘤细胞凋亡情况.流式细胞仪定量检测USP22 siRNA对神经母细胞瘤细胞凋亡及细胞周期分布的影响.结果 与设立的阴性对照组相比较,实验组中神经母细胞瘤细胞中USP22蛋白和mRNA表达显著下降(P＜0.05),神经母细胞瘤细胞增殖明显受到抑制(P＜0.05),凋亡率随时间延长明显上升(P＜0.05),细胞周期中G2/M期的细胞比例明显增高.结论 USP22基因在神经母细胞瘤细胞的增殖中发挥重要的作用,采用siRNA技术能够有效地沉默USP22基因的表达,并显著抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖,其机制可能与调节细胞周期及细胞凋亡相关.
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