【摘 要】
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目的 克隆颠茄AbCYP80F1基因和启动子序列,分析启动子上与调控信号和转录因子相关的调控元件,研究AbCYP80F1基因超表达对颠茄发根中东莨菪碱积累的影响.方法 以莨菪CYP 80F1
【机 构】
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贵州大学生命科学学院/农业生物工程研究院,山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室,山地生态与农业生物工程协同创新中心,贵州贵阳550025
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目的 克隆颠茄AbCYP80F1基因和启动子序列,分析启动子上与调控信号和转录因子相关的调控元件,研究AbCYP80F1基因超表达对颠茄发根中东莨菪碱积累的影响.方法 以莨菪CYP 80F1为探针,在颠茄转录组中进行Blastn检索获得同源的unigene.采用RACE技术克隆AbCYP80F1全长,热不对称PCR技术克隆启动子序列,发根农杆菌浸染法获得超表达AbCYP80F1基因的颠茄发根,对培养的发根中东莨菪碱含量进行HPLC分析.结果 克隆得到1 675 bp的全长AbCYP80F1基因,其编码蛋白与铃铛子的CYP80F1亲缘关系最近.基因上游2 000 bp启动子上包含的顺式作用元件涉及光、无氧、生长素、茉莉酸、赤霉素和低温信号响应,同时包含有MYB、AP2/ERF、WRKY和bHLH转录因子的识别位点.超表达AbCYP80F1基因使颠茄发根中东莨菪碱含量平均提高了1.8倍.结论 AbCYP80F1是颠茄须根特异性表达的合成途径基因,超表达能提高终产物东莨菪碱含量,AbCYP80F1可能受到WRKY和bHLH转录因子的调控.
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