猪肌肉素基因的cDNA克隆与表达

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从人肌肉素基因出发.在dbEST数据库中进行同源性搜索.找到七个有较高同源性的Expressed SequenceTag (DY426490, CF787546, AJ660979, AJ664670, AJ663820, AJ680159, DN106254). 通过拼接和进一步RT-PCR实验验证,获得猪肌肉素基因全长cDNA序列,其全长651 bp,开放阅读框为54-452 bp,编码有132个氨基酸.同源性分析结果表明.与人、小鼠和大鼠的肌肉素基因cDNA编码区(CDS)源性分别为87.2%、77.6%和77.9%.利用克隆出的猪肌肉素cDNA,构建表达载体pGEX-4T-1-musclin,并在BL21大肠杆茵中成功表达和纯化了分子量为38.59 kD的融合蛋白GSToMusclin,并运用蛋白印迹技术进行鉴定.
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