目的 建立稳定过表达芳香化酶的MCF-7细胞(MCF-7-aromatase)和芳香化酶抑制剂来曲唑耐药的MCF-7细胞(MCF-7-LR)模型.方法 采用慢病毒介导的基因转染方法建立MCF-7-aromatase细胞及稳定过表达绿色荧光蛋白(GFP)的MCF-7细胞(MCF-7-GFP).采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR、Western blot法以及免疫沉淀法,检测和验证MCF-7-aromatase 和MCF-7-GFP细胞中aromatase基因的表达.通过WST-1细胞增殖实验,检测MCF-7-aromatase和MCF-7-GFP细胞在睾酮和雌二醇作用下的体外增殖能力,以及MCF-7-aromatase细胞在来曲唑作用下的增殖能力.应用GraphPad Prism软件通过非线性回归法拟合剂量反应曲线,计算来曲唑对MCF-7-aromatase细胞的半数抑制浓度(IC50).将MCF-7-aromatase细胞持续培养在睾酮和来曲唑的培养液中,经过筛选获得来曲唑耐药细胞MCF-7-LR,通过WST-1法检测耐药细胞对来曲唑的耐药性.结果 RT-PCR和实时荧光定量RCR检测结果显示,MCF-7-aromatase细胞中aromatase mRNA的表达量明显高于MCF-7-GFP细胞.Western blot法和免疫沉淀法检测结果均显示,MCF-7-aromatase细胞中aromatase蛋白的表达水平明显高于MCF-7-GFP细胞.WST-1法检测结果显示,经1和10 nmol/L睾酮处理后,MCF-7-aromatase细胞的增殖率分别为溶剂对照组的1.43和1.53倍；经1和10 nmol/L雌二醇处理后,MCF-7-aromatase细胞的增殖率分别为溶剂对照组的1.41和1.55倍.经10 nmol/L睾酮处理后,MCF-7-GFP细胞的增殖率为溶剂对照组的1.12倍.经1和10 nmol/L雌二醇处理后,MCF-7-GFP细胞的增殖率分另为溶剂对照组的1.41和1.51倍.来曲唑以剂量依赖方式抑制睾酮诱导的MC F-7-aromatase细胞的增殖,对MCF-7-aromatase细胞的IC50约为5.3 nmol/L,而对MCF-7-LR细胞的增殖没有显著抑制作用(IC50＞ 1000 nmol/L).结论 成功建立了来曲唑耐药的乳腺癌细胞模型MCF-7-LR,为研究来曲唑的耐药机制奠定了重要的实验基础.
芳香化酶抑制剂来曲唑耐药的乳腺癌细胞模型的建立
【摘 要】
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目的 建立稳定过表达芳香化酶的MCF-7细胞(MCF-7-aromatase)和芳香化酶抑制剂来曲唑耐药的MCF-7细胞(MCF-7-LR)模型.方法 采用慢病毒介导的基因转染方法建立MCF-7-aromatase细胞及稳定过表达绿色荧光蛋白(GFP)的MCF-7细胞(MCF-7-GFP).采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR、Western blot法以及免疫沉淀法,检测和
【机 构】
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(100021中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室),(100021中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室)
【出 处】
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中华肿瘤杂志
【发表日期】
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2013年35期
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