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根据GenBank已发表的鸭瘟病毒活疫苗C—KCE株基因组序列设计一对引物，扩增出含TK基因完整ORF的2．7kb的片段，克隆至pMDl8Tsimple载体。利用该片段内的两个酶切位点劢oI和EcoRV，切除TK基因内的244bp，用T4DNA聚合酶补平末端；pVAX1-LacZ用NruI和NarI双酶切，回收含LacZ表达盒的4．1kb片段，通过平末端连接将LacZ表达盒插入到TK基因中，从而获得了转移载体pTK—LacZ，为构建重组鸭瘟病毒奠定了基础。