敲除GGTA1同时表达人白细胞抗原G5的基因修饰猪的构建

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong601
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
由于猪的诸多生理和遗传特征与人类近似,猪一直被认为是理想的异种器官移植候选供体动物.但是物种之间严重的免疫不相容是影响猪到灵长类异种器官移植的最关键因素.为了克服物种之间的免疫排斥反应,诸多研究对猪进行了各种各样的基因修饰,消除或抑制造成异种器官移植的免疫原,以获得可应用于灵长类移植的供体器官.本研究利用转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)对猪的α-1,3-半乳糖苷转移酶(α-1,3-galactosyltransferase,GGTA1)基因进行敲除,该基因编码的酶催化合成α-1,3-半乳糖,这是导致猪到灵长类异种器官移植中产生超急性免疫排斥的关键因子.同时本研究也通过转基因方法导入一种重要的免疫抑制因子,人类白细胞抗原G5(human leukocyte antigen-G5,HLA-G5),来进一步增加猪器官在异种器官移植中的免疫耐受.本研究筛选了 GGTA1双等位基因敲除(GGTA1 knockout,GTKO)且HLA-G5转基因导入的猪成纤维细胞,并通过体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)构建相应的基因修饰猪模型.本研究获得了20头GGTA1双等位基因敲除的克隆猪,其中10头同时表达HLA-G5蛋白.经检测,α-1,3-半乳糖在GTKO/HLA-G5克隆猪的组织和细胞上完全缺失,Western blotting和免疫荧光染色显示,HLA-G5在克隆猪的组织和细胞上成功表达.功能学分析显示,从GTKO/HLA-G5克隆猪分离的成纤维细胞具有更好的免疫耐受,相比于单一的GTKO猪和未经基因修饰的野生型猪,GTKO/HLA-G5克隆猪的细胞对补体介导的细胞裂解反应具有更强的耐受.GTKO/HLA-G5克隆猪可以为异种器官移植提供一种有用的动物模型.“,”Pigs are considered as ideal donors for xenotransplantation because they have many physiological and anatomical characteristics similar to human beings.However,antibody-mediated immunity,which includes both natural and induced antibody responses,is a major challenge for the success of pig-to-primate xenotransplantation.Various genetic modification methods help to tailor pigs to be appropriate donors for xenotransplantation.In this study,we applied transcription activator-like effector nuclease(TALEN)to knock out the porcine α-1,3-galactosyltransferase gene GGTA1,which encodes Gal epitopes that induce hyperacute immune rejection in pig-to-human xenotransplantation.Meanwhile,human leukocyte antigen-G5 gene HLA-G5,which acts as an immunosuppressive factor,was co-transfected with TALEN into porcine fetal fibroblasts.The cell colonies of GGTA1 biallelic knockout with positive transgene for HLA-G5 were chosen as nuclear donors to generate genetic modified piglets through a single round of somatic cell nuclear transfer.As a result,we successfully obtained 20 modified piglets that were positive for GGTA1 knockout(GTKO)and half of them expressed the HLA-G5 protein.Gal epitopes on the cell membrane of GTKO/HLA-G5 piglets were completely absent.Western blotting and immunofluorescence showed that HLA-G5 was expressed in the modified piglets.Functionally,the fibroblasts from the GTKO/HLA-G5 piglets showed enhanced resistance to complement-mediated lysis ability compared with those from GTKO-only or wild-type pigs.These results indicate that the GTKO/HLA-G5 pigs could be a valuable donor model to facilitate laboratory studies and clinics for xenotransplantation.
其他文献
淀粉样蛋白级联假说是阿尔茨海默病(Alzheimer\'s disease,AD)病因学的核心,但在过去几年中,靶向淀粉样斑块并未实现成功的免疫治疗.最近几年,不同形式的β淀粉样蛋白(Aβ)引起人们的关注.本文总结了关于早发性AD患者大脑中不同Aβ突变体和散发性AD患者大脑中已经鉴定出的经过酶切及修饰产生的不同形式Aβ的研究进展,重点阐述了这些Aβ的聚集特性和在AD发展中的影响,并对目前报道的Aβ变体检测分析方法进行了概述.本文旨在为今后深入研究不同形式的Aβ及相关分子在AD病理过程中的作用、开发诊断
“我是马列主义坚定信仰者,捐赠遗体是我能做的最后一点贡献……”在湖南省益阳市资阳区长春经济开发区南丰社区廖家托组,有一位令人敬佩的老人,身患癌症10年,家庭困难,但他心中依然充满大爱,节衣缩食帮助困难群众,被朴实的乡亲称为“大好人”.他就是70岁的廖更生.近日,笔者专程采访了廖更生老人.虽然已是古稀老人,但廖更生红光满面,思维清晰,声音洪亮,说起话来精气神十足.然而,谁也想不到,他是一位患过癌症的老人.
期刊
肌少症(sarcopenia)是以骨骼肌质量和肌力进行性下降为特征的增龄性综合征,探究其发病机理对于肌少症的预防与治疗具有重要意义.研究表明,外泌体(exosomes)与肌少症关联密切,可能是一种有益的削弱/防治手段,但其机制尚未厘清.近期研究表明,外泌体富含运动因子/细胞因子,其不仅参与机体细胞与组织间的交互作用(cross talk),亦介导了包括骨骼肌细胞增殖与分化在内的诸多病理生理过程.此外,运动可通过促进外泌体的释放并调节外泌体携带的miRNAs和/或蛋白质的表达,从而有效改善肌少症.本文就外泌
人老了,头发花白,睡意昏沉,眼神迷离,向着街口张望,几分怅然,又有几分期许.退休前忙忙碌碌,喜欢阅读但苦于没有多少闲暇.退休后,有了大把的空闲,又有阅读的嗜好,却并不太清楚阅读的方向.作为过来人,我就有过这样的亲历,经过多年的摸索、观察,对老年人读什么书好,慢慢地有所领悟,今不揣浅陋,抛砖引玉.
期刊
青年毛泽东在1915年8月致萧子升的信中,抄赠了一篇“自讼”赋.该赋共390个字符,借鉴了枚乘《七发》的赋体,以客、主问答的叙事形式展开,借物言意.毛泽东求学期间在读赋时也会学作赋,作过多少赋现在难以知道.毛泽东在致萧子升信时,只说送“日记一段”“试一观之”,而不说以一赋相赠,其意是表明谦逊态度,而不在信中卖弄风骚.他这篇“自讼”赋,贵在自责;对自己的学养、品德、修齐、言行、志向进行自我反省,作一明确的评判;敢于解剖自己,以高标准严苛要求自己,以祈实现“大我”的目标.
在美国虚拟货币监管中,认定虚拟货币证券性质是SEC监管的重要前提.区块链项目开发者试图营造功能型代币的形象以逃避监管.由于豪威测试的模糊性,美国证券监管机构认定瑞波币的证券性质存在争议.豪威测试的四项要件中,“对投资利益的合理期待”和“仅仅依赖第三方努力”是认定虚拟货币是否构成证券的关键.监管者需区分投资者的使用目的和投资目的,观察虚拟货币是否依赖第三方开发者,将未实现“充分去中心化”的虚拟货币纳入证券监管.虚拟货币市场风险巨大,中国监管机构应提高对虚拟货币的风险认知,调整监管思路,在捍卫中国金融主权的基
细胞膜损伤在骨骼肌、血管内皮及胃肠道上皮等组织较为常见,及时有效的细胞膜修复(plasma membrane repair,PMR)能够保证细胞存活,反之,细胞则可能“死亡”.PMR由许多“修补匠”协同完成,它们分工明确且呈现出一定的时序特点.转运必需内体分选复合体(endosomal sorting complex required for transport,ESCRT)是近年来研究发现的在细胞膜损伤修复中发挥关键作用的“修补匠”,其由ESCRT-0、ESCRT-Ⅰ、ESCRT-Ⅱ、ESCRT-Ⅲ、V
人说“家庭是社会的细胞,是幸福生活的港湾,更是拒腐防变言传身教的前沿.”对此,我是深有体会.rn结婚40多年来,老伴儿一直默默承担着家里监督员的职权,每逢遇到有大事时,老伴儿就会嘱咐我和家人:“出门在外一定要注意自己的言行举止,不能由着性子胡来.更不能贪图小便宜做对不起祖宗的事情.”老伴的嘱咐,就像一封《家风廉洁自律提醒书》,时刻提醒我廉洁自律,守住底线.
期刊
膜上G蛋白偶联受体(GPCRs)是骨细胞感知外部信号刺激的关键跨膜蛋白,因其在成骨细胞(OB)、软骨细胞和破骨细胞(OC)分化和功能发挥上扮演的关键角色而在骨代谢研究领域备受关注.GPCRs功能缺失或异常升高后,骨细胞内环境稳态失衡,导致OB、软骨细胞和OC分化及代谢紊乱,骨组织微细结构退化.运动通过促进骨形成并抑制骨吸收来改善骨代谢,其机制与GPCRs(如GPR48、GPR54、GPR30等)介导的关键信号途径(cAMP/PKA/Atf4、JNK/AP-1、ERK1/2等)和细胞因子(T-PINP、Nk
外泌体是一种在细胞间信息传递和物质运输中起重要作用的细胞外囊泡,它携带来源于宿主细胞的蛋白质、脂质和RNA等物质,并对受体细胞的生理状态产生重要影响.黄病毒科病毒如丙型肝炎病毒和冠状病毒科病毒如新型冠状病毒导致的疾病严重威胁人类健康,深入了解黄病毒科和冠状病毒科病毒与宿主的相互作用,对于筛选治疗的细胞靶点以及外泌体疫苗的研究具有重要意义.外泌体在黄病毒科和冠状病毒科病毒感染过程中扮演着非常重要的角色,越来越多的研究表明,外泌体的蛋白质和RNA具有抗病毒效应,病毒可以通过劫持外泌体介导的细胞通讯来损害宿主及