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目的
对2018年云南省6个地州(市)510份手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病例粪便标本进行基因检测并对柯萨奇病毒A6型(Coxsackievirus A6, CV-A6)完整VP1区基因特征进行分析。
方法用病毒RNA提取试剂盒从粪便标本中直接提取病毒RNA,用MD91/OL68-1引物对病毒VP4区基因进行RT-PCR和测序,确定病毒型别,再用相关引物扩增肠道病毒VP1区全序并测序;按参考文献下载基因库中CV-A6病毒完整VP1区基因参考序列,用MEGA5.2软件计算不同毒株的核苷酸和氨基酸差异率,并构建系统进化树,进行基因特征和分子流行病学分析。
结果从510份标本中获得57份标本的VP4和VP1区基因,核酸检测阳性率为11.17%(57/510),其中CV-A6 43份,阳性率为8.43%(43/510),CV-A10 6份,阳性率为1.17%(6/510),EV-A71 2份,阳性率为0.39%(2/510),CV-A9 2份,阳性率为0.39%(2/510),另外检测到CV-A4、CV-A5、CV-B1和E11各1株,阳性率均为0.19%(1/510)。基因进化分析表明,云南43株CV-A6均为基因型D的D3亚型。
结论510份标本中,CV-A6的检出率最高(8.43%),占阳性数的75.44%(43/57),CV-A10检出率为1.17%(6/510),EV-A71的检出率为0.39%(2/510),2018年云南省发生了以CV-A6为主的HFMD大暴发。基因特征分析表明,跟往年全国的情况一样,云南省2018年暴发的CV-A6为D3基因亚型。