【摘 要】
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目的 建立一种快速检测麻疹病毒的方法.方法 以分离到的麻疹病毒RNA为模板,利用环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计合成3套引物,特异型识别病毒基因的8个位点,在反转录酶作用下,63℃扩增60 min,80℃2 min终止反应,最终产物分别经凝胶电泳和荧光目视观察.通过real-time仪实时监测反应过程,同时将该方法的灵敏度、特异度与常规RT-PCR、real-time RT-PCR进行比较
【机 构】
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200082上海市虹口区疾病预防控制中心,第二军医大学基础部流行病教研室,第二军医大学基础部流行病教研室
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目的 建立一种快速检测麻疹病毒的方法.方法 以分离到的麻疹病毒RNA为模板,利用环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计合成3套引物,特异型识别病毒基因的8个位点,在反转录酶作用下,63℃扩增60 min,80℃2 min终止反应,最终产物分别经凝胶电泳和荧光目视观察.通过real-time仪实时监测反应过程,同时将该方法的灵敏度、特异度与常规RT-PCR、real-time RT-PCR进行比较.结果 RT-LAMP反应约1h即可完成,最终产物经电泳观察可见大小片段不等的呈梯度的扩增条带,目视显示反应液颜色由黄色变为绿色.灵敏性是常规RT-PCR和real-time RT-PCR的100倍.结论 RT-LAMP方法具有灵敏、特异、快速、简便、成本低等特点,适用于基层和现场使用。
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