【摘 要】
：
目的 用大肠埃希菌表达PF3D7_1361800蛋白,制备多克隆抗体. 方法 根据PF3D7_1361800蛋白的水溶性分析,设计目的基因引物,采用PCR技术扩增目的基因片段,长度为897 bp.将其克隆
【机 构】
：
吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病教育部重点实验室,吉林长春130062
论文部分内容阅读
目的 用大肠埃希菌表达PF3D7_1361800蛋白,制备多克隆抗体. 方法 根据PF3D7_1361800蛋白的水溶性分析,设计目的基因引物,采用PCR技术扩增目的基因片段,长度为897 bp.将其克隆到pMD18-T载体,测序正确后将该片段连接到pET-28a和pGEX-4T-1表达载体中,测序鉴定正确后将重组质粒转化到大肠埃希菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL中,用0.1 mmol/L IPTG诱导表达,用His GraviTrapTM和Gluthat hione-Sepharose 4B亲和层析柱纯化目的蛋白质.用His-tag重组蛋白免疫家兔,每2周免疫一次,分别于免疫后14、28、42、52 d采血,用间接ELISA法测定抗体效价.以制备的多克隆抗体作为一抗,采用Western blot分析其特异性. 结果 经测序和酶切鉴定,成功构建了表达载体pET-PF3D7_1361800和pGEx-PF3D7_1361800.SDS-PAGE分析亲和纯化的重组蛋白纯度较好,间接ELISA法检测该蛋白免疫兔血清抗体效价＞1∶16 000. 结论 成功克隆了PF3D7_1361800的表达载体并表达目的蛋白,制备的抗重组蛋白多克隆抗体具有特异性,为研究该蛋白质的生物学功能及疟疾疫苗的研发奠定了基础.
其他文献
在最近几年,鸭嘴形橡胶止回阀已经用于许多海底排放系统,以防止海水倒流和沉淀物生成,与以往固定圆管的出水口不同的是:鸭嘴阀的射流速度与出口流量呈复杂的非线性关系,试验
目的以主要表面糖蛋白上游保守区UCS基因对中国耶氏肺孢子菌进行基因多态性分析。方法用巢式PCR扩增127例耶氏肺孢子菌感染患者呼吸道标本中主要表面糖蛋白上游保守区UCS基因
目的 了解黄粉虫养殖环境中孳生的螨类,不同种螨类间的相互关系及酪阳厉螨的生物学特性. 方法 实验室人工养殖黄粉虫.从养殖盒中采集100份饲料样品,过筛后分成黄粉虫及筛内阻
针对临床专业特点,结合培养高素质创新性医学人才知识、能力、素质的协调发展为目标,深入开展基础医学实验课程教学内容、教学方法、教学方式、教材建设、实验教学平台建设、
目的用光学显微镜观察椭圆食粉螨主要发育期的形态特征。方法采集一面粉厂的面粉灰尘样品,分离孳生螨,纯化后清洗,制备标本玻片,光学显微镜下观察椭圆食粉螨主要发育期的形态
对于严重的创伤、肿瘤所导致的大段骨缺损,如何修复,恢复骨的连续性仍然是骨科面临的主要问题之一.大段骨缺损的重建,目前主要应用自体骨移植、异体骨移植和人工假体等三种方
本文研究了血管外皮瘤与孤立性纤维性肿瘤，主要内容有：1.血管外皮瘤(HPC)与孤立性纤维性肿瘤(SFT)的关系HPC的疾病本质和组织学特征。2.HPC与SFT的免疫表型。3.HPC及SFT的电镜
骨与软组织肿瘤为常见的肿瘤之一,它严重危害人类健康.因此,寻求新的骨与软组织肿瘤诊治方法是目前临床医学亟待解决问题.尽管近年来医学科学发展迅速,并取得了可喜的进展,但
目的:将带血管蒂的骨瓣植入灭活瘤段骨的保肢技术用于恶性骨肿瘤切除后的修复重建,探讨此技术的临床应用效果. 方法:自2000年4月-2005年3月对10例恶性骨肿瘤患者经新辅助
粘液样变是软组织肿瘤和瘤样病变的一种常见现象,其本质大多为透明质酸和酸性粘多糖.几乎所有的软组织肿瘤和瘤样病变都可发生,或在肿瘤的某个阶段发生粘液样变性.如粘液性平