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[摘 要]金线莲为兰科开唇兰属多年生草本珍稀中草药。采用野生金线莲的种子，无菌萌发后，进行种质创制，6-BA浓度对诱导变异植株影响较大；在MS+6-BA0.3+NAA0.5培养基中快繁效果较好；在MS+NAA1.0培养基中，根系发达，植株健壮，生根率达100%。
[关键词]野生植物 金线莲 种质创制 快繁
中图分类号：TU198 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）28-0235-01
1.植物名称
金线莲（Anoectochilus roxburghii.）
2. 材料类别
野生金线莲，种子，来源于文山麻栗坡。无菌萌发后，选叶片上金线明显单株的顶芽和侧芽作为繁殖材料。
3. 培养条件
基本培养基为MS：（1）种子萌发培养基：无激素1/2MS+2%S；（2）侧芽诱导与培养基：S1： MS+无激素； S2： MS+BA0.5mg·L-1（单位下同）+ NAA0.1；S 3： MS+BA1.0+ NAA0.1；S 4： MS+BA2.0+ NAA0.1；S 5： MS+BA5.0+ NAA0.1；蔗糖均为3%。（3）增殖培养基：MS+BA0.3 +NAA0.5 +3%S+香蕉0.1%；（4）生根培养基：MS+NAA0.5 +3%S+香蕉0.1% 。以上培养基含琼脂5g·L-1，PH5.8。温度为25±1℃，光照时间8h.d-1，光照强度1000lx。
4. 生长与分化
4.1材料与消毒
选柔软的牙刷，用肥皂水刷洗未开裂的金线莲新鲜果实表皮，自来水清洗后，在操净台上用无菌水冲洗2-3次，用1‰的升汞（氯化汞）泡15-20分钟。用无菌水冲洗3-5次，最后在无菌的培养皿中切开果实，把种子均匀播种于培养基（1）中，置于室内温度在（25±1）℃的条件下培养。20d后，种子开始萌发，50d后顶芽和腋芽长高约3-5cm，无丛芽产生。
4.2 顶芽和腋芽的诱导
将萌发的种子苗，切成带一个腋芽或顶芽的茎段，按一株一个体系编号，转接于培养基（2）-中，经过45-60d的培养，茎段上原有的顶芽或侧芽生长较快，约4-5cm，带6-8个侧芽，在原茎段的基部诱导出1-2个细弱的丛芽。
4.3 金线莲种质创制
在金线莲诱导丛芽过程中，发现植株叶片颜色、金线网纹、茎秆颜色等有变异产生，实验结果显示，6-BA浓度对诱导变异植株影响较大。当发现有优良形状产生时，及时把变异植株挑出来进行单独的扩繁。
4.4快速增殖扩繁
当植株成苗后，将其切成带一个腋芽或顶芽的单节，分别转接于培养基上（3）中S6 - S11进行增殖培养扩繁。试验结果显示：S10 ：MS+6-BA0.3+NAA0.5效果最好，苗粗壮，茎节长，有根，无丛芽，叶肥伸展。每次继代时间为50-60d左右， 60d侧芽增殖倍数约为8.6，通过反复切割转接，在较短时间里可得到大量植株。
培养60d的结果表明：在S6激素（BA0.1mg/l）中：小苗细弱，节间较长，苗高约6.6cm，无丛芽形成，增殖倍数4.6；随着BA浓度从0.1增加到0.5时，茎秆逐渐增粗，芽节数量增多，但茎节逐渐缩短，叶子也开始缩小。当NAA增加到0.5时，明显促进了根毛的产生；在S10：MS + 6-BA 0.3 + NAA 0.5培养基中，生长状况最佳，每个植株上形成的芽节数平均为9.3个，叶子伸展，植株生长健壮；当BA和NAA都达到0.5时，节间缩短，根毛较少，苗弯曲，叶小且卷，株高下降，生长明显受到抑制，平均每个植株的芽节数减少到5.9个。
4.5 生根
选取植株生长健壮种苗，将其切成带一个腋芽或顶芽的单节，茎节上下分别留1cm的茎段，转接于培养基上（4）中R1 – R9进行生根培养。40-60d后统计，在R2 MS+NAA1.0培养基中的效果较好，根系发达，植株健壮，生根率达100%。
60d后结果表明：不同种类生长素及同生长素浓度的培养基均可诱导生根。在R3：MS+ NAA1.0培养基中生根植株长势最好，种苗粗壮，叶子伸展。随着生长素浓度增加，生根率逐渐下降，植株茎部和根部褐化现象产生。在添加IAA的培养基中，无论低浓度还是高浓度，植株的长势均较差，苗细弱。
4.6移栽
当苗高5-8cm时，把瓶苗搬到炼苗大棚，光照强度3000-4000LX，，适应20-30d。然后开瓶，取出小植株，用清水洗净根部，移栽到事先准备好的富含腐殖质疏松基质中，保持基质湿度70-75%，光照强度1500-2000LX。一个月后，成活率可达95%以上。
5 意义与进展
金线莲为兰科开唇兰属多年生草本珍稀中草药。全世界有40余种，分布于亚洲热区至大洋洲，我国有 20 种，2 变种，产于西南部至南部。别名金线兰、金丝草，在民间使用范围较广，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。多用于治疗肾盂肾炎、糖尿病、高血脂、乙型肝炎等疾病。目前金线莲野生资源已被采集至枯。金线莲组培和人工栽培有报道，但优良种质筛选、纯化与种质創制没见报道。
参考文献
1、黄小凤，周志东，杨成，袁志永，蔡楚雄，刘世平；珍稀药用植物金线莲及其栽培技术[J]；广东农业科学；2005年05期
2、张以忠；邓琳琼；黄丽华；陈坤浩；；金线莲研究的现状与展望[J]；贵州科学；2007年02期
3、李光；龚宁；周伟香；郑继军；外源生长物质对金线兰增殖培养的影响[J]；贵州师范大学学报（自然科学版）；2006年04期
4、蔡文燕，肖华山，范秀珍；金线莲研究进展（综述）[J]；亚热带植物科学；2003年03期
5、李光；金线兰组织培养及组培苗抗旱性研究[D]；贵州师范大学；2007年
6、周伟香；金线兰种子苗耐热抗冷性研究[D]；贵州师范大学；2007年
7、周黎；土壤干旱胁迫对金线兰三种组培苗抗旱性的影响[D]；贵州师范大学；2008年
8、陈远光，韩湘玲；金线莲引种栽培试验初探[J]；中国林副特产；1997年03期
9、许文江，陈裕，林坤瑞；药用野生金线莲植物资源的研究[J]；福建热作科技；2000年04期
10、何云芳，余有祥，裘丽珍，杨霞；金线莲组培苗的试管外生根和大田移栽技术[J]；浙江林业科技；1998年02期
11、黄慧莲，刘贤旺；金线莲的组培快繁[J]；植物杂志；2002年04期
12、林辉；金线莲组织培养的研究状况[J]；海峡药学；2004年02期
资助 海南省科技厅国际科技合作专项项目：金线莲的良种选育、组培快繁及标准化生产示范研究（KJHZ2015-34）
[关键词]野生植物 金线莲 种质创制 快繁
中图分类号：TU198 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）28-0235-01
1.植物名称
金线莲（Anoectochilus roxburghii.）
2. 材料类别
野生金线莲，种子，来源于文山麻栗坡。无菌萌发后，选叶片上金线明显单株的顶芽和侧芽作为繁殖材料。
3. 培养条件
基本培养基为MS：（1）种子萌发培养基：无激素1/2MS+2%S；（2）侧芽诱导与培养基：S1： MS+无激素； S2： MS+BA0.5mg·L-1（单位下同）+ NAA0.1；S 3： MS+BA1.0+ NAA0.1；S 4： MS+BA2.0+ NAA0.1；S 5： MS+BA5.0+ NAA0.1；蔗糖均为3%。（3）增殖培养基：MS+BA0.3 +NAA0.5 +3%S+香蕉0.1%；（4）生根培养基：MS+NAA0.5 +3%S+香蕉0.1% 。以上培养基含琼脂5g·L-1，PH5.8。温度为25±1℃，光照时间8h.d-1，光照强度1000lx。
4. 生长与分化
4.1材料与消毒
选柔软的牙刷，用肥皂水刷洗未开裂的金线莲新鲜果实表皮，自来水清洗后，在操净台上用无菌水冲洗2-3次，用1‰的升汞（氯化汞）泡15-20分钟。用无菌水冲洗3-5次，最后在无菌的培养皿中切开果实，把种子均匀播种于培养基（1）中，置于室内温度在（25±1）℃的条件下培养。20d后，种子开始萌发，50d后顶芽和腋芽长高约3-5cm，无丛芽产生。
4.2 顶芽和腋芽的诱导
将萌发的种子苗，切成带一个腋芽或顶芽的茎段，按一株一个体系编号，转接于培养基（2）-中，经过45-60d的培养，茎段上原有的顶芽或侧芽生长较快，约4-5cm，带6-8个侧芽，在原茎段的基部诱导出1-2个细弱的丛芽。
4.3 金线莲种质创制
在金线莲诱导丛芽过程中，发现植株叶片颜色、金线网纹、茎秆颜色等有变异产生，实验结果显示，6-BA浓度对诱导变异植株影响较大。当发现有优良形状产生时，及时把变异植株挑出来进行单独的扩繁。
4.4快速增殖扩繁
当植株成苗后，将其切成带一个腋芽或顶芽的单节，分别转接于培养基上（3）中S6 - S11进行增殖培养扩繁。试验结果显示：S10 ：MS+6-BA0.3+NAA0.5效果最好，苗粗壮，茎节长，有根，无丛芽，叶肥伸展。每次继代时间为50-60d左右， 60d侧芽增殖倍数约为8.6，通过反复切割转接，在较短时间里可得到大量植株。
培养60d的结果表明：在S6激素（BA0.1mg/l）中：小苗细弱，节间较长，苗高约6.6cm，无丛芽形成，增殖倍数4.6；随着BA浓度从0.1增加到0.5时，茎秆逐渐增粗，芽节数量增多，但茎节逐渐缩短，叶子也开始缩小。当NAA增加到0.5时，明显促进了根毛的产生；在S10：MS + 6-BA 0.3 + NAA 0.5培养基中，生长状况最佳，每个植株上形成的芽节数平均为9.3个，叶子伸展，植株生长健壮；当BA和NAA都达到0.5时，节间缩短，根毛较少，苗弯曲，叶小且卷，株高下降，生长明显受到抑制，平均每个植株的芽节数减少到5.9个。
4.5 生根
选取植株生长健壮种苗，将其切成带一个腋芽或顶芽的单节，茎节上下分别留1cm的茎段，转接于培养基上（4）中R1 – R9进行生根培养。40-60d后统计，在R2 MS+NAA1.0培养基中的效果较好，根系发达，植株健壮，生根率达100%。
60d后结果表明：不同种类生长素及同生长素浓度的培养基均可诱导生根。在R3：MS+ NAA1.0培养基中生根植株长势最好，种苗粗壮，叶子伸展。随着生长素浓度增加，生根率逐渐下降，植株茎部和根部褐化现象产生。在添加IAA的培养基中，无论低浓度还是高浓度，植株的长势均较差，苗细弱。
4.6移栽
当苗高5-8cm时，把瓶苗搬到炼苗大棚，光照强度3000-4000LX，，适应20-30d。然后开瓶，取出小植株，用清水洗净根部，移栽到事先准备好的富含腐殖质疏松基质中，保持基质湿度70-75%，光照强度1500-2000LX。一个月后，成活率可达95%以上。
5 意义与进展
金线莲为兰科开唇兰属多年生草本珍稀中草药。全世界有40余种，分布于亚洲热区至大洋洲，我国有 20 种，2 变种，产于西南部至南部。别名金线兰、金丝草，在民间使用范围较广，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。多用于治疗肾盂肾炎、糖尿病、高血脂、乙型肝炎等疾病。目前金线莲野生资源已被采集至枯。金线莲组培和人工栽培有报道，但优良种质筛选、纯化与种质創制没见报道。
参考文献
1、黄小凤，周志东，杨成，袁志永，蔡楚雄，刘世平；珍稀药用植物金线莲及其栽培技术[J]；广东农业科学；2005年05期
2、张以忠；邓琳琼；黄丽华；陈坤浩；；金线莲研究的现状与展望[J]；贵州科学；2007年02期
3、李光；龚宁；周伟香；郑继军；外源生长物质对金线兰增殖培养的影响[J]；贵州师范大学学报（自然科学版）；2006年04期
4、蔡文燕，肖华山，范秀珍；金线莲研究进展（综述）[J]；亚热带植物科学；2003年03期
5、李光；金线兰组织培养及组培苗抗旱性研究[D]；贵州师范大学；2007年
6、周伟香；金线兰种子苗耐热抗冷性研究[D]；贵州师范大学；2007年
7、周黎；土壤干旱胁迫对金线兰三种组培苗抗旱性的影响[D]；贵州师范大学；2008年
8、陈远光，韩湘玲；金线莲引种栽培试验初探[J]；中国林副特产；1997年03期
9、许文江，陈裕，林坤瑞；药用野生金线莲植物资源的研究[J]；福建热作科技；2000年04期
10、何云芳，余有祥，裘丽珍，杨霞；金线莲组培苗的试管外生根和大田移栽技术[J]；浙江林业科技；1998年02期
11、黄慧莲，刘贤旺；金线莲的组培快繁[J]；植物杂志；2002年04期
12、林辉；金线莲组织培养的研究状况[J]；海峡药学；2004年02期
资助 海南省科技厅国际科技合作专项项目：金线莲的良种选育、组培快繁及标准化生产示范研究（KJHZ2015-34）