【摘 要】
：
目的:构建人抗HER2单链抗体(ScFv)/人轻链恒定区(Ck)/鱼精蛋白截短体(tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达、纯化并分析该融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HER2单链抗体e2
【机 构】
：
第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,第四军医大学基础部免疫学教研室
【基金项目】
：
国家重点基础研究发展(973)计划项目(2004CB518805);国家自然科学基金(30370314,30400379)
论文部分内容阅读
目的:构建人抗HER2单链抗体(ScFv)/人轻链恒定区(Ck)/鱼精蛋白截短体(tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达、纯化并分析该融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HER2单链抗体e23sFv基因和轻链恒定区编码序列(Ck),连接成ScFv/Ck片段,人工合成tP序列,连接于ScFv/Ck末端,构建成ScFv/Ck/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a后,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定后,用Ni-NTA螯合层析介质纯化.细胞ELISA分析ScFv/Ck/tP融合蛋白抗原亲合活性,凝胶迁移实验检测ScFv/Ck/tP融合蛋白与DNA的结合活性.结果:成功构建了人抗HER2ScFv/Ck/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了可溶性表达.表达的ScFv/Ck/tP融合蛋白保持了与抗原的结合活性,同时具有结合DNA的能力.结论:ScFv与Ck,tP融合后,同时具有抗原和DNA结合活性,为该ScFv用于HER2阳性肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础.
其他文献
煤层原始瓦斯压力的准确测定关系着矿井的安全生产,而测压钻孔的封孔技术是影响煤层原始瓦斯压力测定的重要因素。通过分析现有煤层瓦斯压力测定封孔技术的主要优缺点和适用
目的探讨经胸微创切口房间隔缺损封堵术治疗房间隔缺损（atrial septal defect，ASD）的临床疗效。方法取胸骨右缘第四肋间切口，长约2～3mm，切开心包并悬吊；于右心房壁缝双荷包线，切开，将
目的 通过分析后腹膜卡波西样血管内皮瘤的诊治过程,探讨该类疾病的诊断与治疗方法.方法 复旦大学附属儿科医院外科近年来成功治疗后腹膜卡波西洋血管内皮瘤伴血小板减少患儿
针对一类不确定性非线性系统的传统模糊自适应控制方案存在的缺陷，利用第一类模糊逻辑系统直接作为非线性系统控制器，提出了一种模糊自适应鲁棒控制策略。在传统方案的基础上加
从“手之舞之,足之蹈之”到现如今种类多样的舞蹈,舞蹈一直通过各种途径传承与发展下来,不论早期的不为人知的已泯灭的舞蹈还是新时代中不断衍生出的新的舞蹈种类,人类一直见
<正>在明代诸帝中崇道最笃者,当数明世宗朱厚熜,也即嘉靖皇帝(1521—1566年在位)。嘉靖十五年(1536)五月,一场大火烧掉了169尊佛像,和约13000斤佛骨、佛牙等物。在佛殿的旧址
目前国内外的餐饮企业已经处于成熟的发展阶段，形象设计塑造企业巨大价值的理念也已经渗透到各个行业。
在当今的大数据时代,能从数量庞大的原始数据中获取有用的数据,指导企业的决策,整合企业的信息,对促进企业高效经营有积极作用。随着会计大数据时代的来临,企业要向现数据分