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摘要：目的：对滁州市2013年流感监测结果进行分析，了解本地区流感流行趋势，为滁州市的流感防控工作提供科学依据。方法：通过中国流感/人禽流感监测信息系统，对滁州市流感监测哨点医院门诊就诊病例和流感样病例（ILI）监测数据进行统计，分析ILI在人群中的流行变化趋势；将采集于流感监测哨点医院和爆发疫情病例咽拭子通过Real-time PCR检测病毒核酸，检测阳性标本接种MDCK细胞，采用标准抗血清鉴定阳性分离株型与亚型。结果：2013年第1周--52周滁州市流感监测哨点医院共报告ILI 951例，ILI就诊百分比为0.66%，其中5岁以下儿童为ILI主要人群。共采集ILI咽拭子982份，检测出流感核酸阳性标本148 例，检出率为15.07%，其中混合型1份，H1N1（2009）54 份，季节性流感H3 25 份，H7 1份，流感B/Y（B/Y）67份，MDCK 分离到29株流感病毒。共报告ILI暴发疫情4起，优势毒株不同。滁州市流感活动高峰时间为冬春季。结论：滁州市2013 年以H1N1（2009）和B/Y流感流行为主。流感是儿童常见的传染病，冬春季有一个流行高峰。应加强对流感的监测和健康干预。
关键词：流感；疫情；监测
Analysis of influenza etiology surveillance results in Chuzhou in 2013
ZHANG Sai1，2，LU Jun1，GUO Yanyan1，2（1.Anhui University of Science & Technology Huainan，232000，China；2.Chuzhou Center for Disease Control and Prevention，Chuzhou，239000，China）
【Abstract】 Objective To analyze the results and the prevalent trends of influenza surveillance in 2013，and provide the scientific basis for prevention and control of influenza in Chuzhou.Methods The data of ILI（Influenza-like illness）were collected from one sentinel hospital by influenza surveillance information system in 2013，and the prevalent trends were analyzed.The throat swab specimens were collected from the ILI of sentinel hospitals and outbreaks，detected by real-time RT-PCR method，of which positive samples inoculated with MDCK cells and then identified by hemagglutination（HA）test.Results In 2013，951 cases were reported as ILI from the influenza sentinel hospital，and the hospital visiting ratio was 0.66%，of which the most is the children under 5-years old.982 throat swabs were collected，and 148 cases were nucleic acid testing positive at the rate of 15.07%，including 1 strain of mixed type，54 strains of H1N1（2009），25 strains of H3，1 strain of H7 and 67 strains of B/Yamagata.29 strains influenza virus were isolated by MDCK.There were 4 ILI outbreaks reported and the main outbreak related predominant strains were different. Conclusion：In 2013，the type A（H1N1/2009）and B（Yamagata）were dominant in Chuzhou.The influenza is popular in children，can be found a peak in spring and winter.Monitoring and health interventions of influenza should be greater attention.
【Key words】 Influenza；outbreak；surveillance
流行性感冒簡称流感，是由流行性感冒病毒引起的一种常见的急性呼吸道传染病。流感病毒是RNA病毒属正黏病毒科，有3种型别，为甲（A）、乙（B）、丙（C）。流感病毒易变异，每个人都有感染的可能性，极易造成流行，是人类面临的主要公共健康问题之一，是第一个被世界卫生组织列为全球监测的传染病[1]。Real time PCR是在普通PCR的基础上发展起来的具有高灵敏度和特异性的检测技术，现已广泛应用于流感监测网络实验室。现运用Real time PCR及病毒分离培养技术对2013年滁州市的ILI进行检测。
1 材料与方法 1.1 监测对象
选择滁州市第一人民医院发热门诊、儿科、急诊的发热（腋下体温≥38℃），伴有咳嗽或咽痛之一的患者。
1.2 监测方法
1.2.1 ILI监测方法
参照《全国流感监测方案（2010年版）》[2]要求，哨点医院每周采集5～15 份发病3 d内尚未服用抗病毒药物的流感样病例咽拭子标本。标本采集后在4 ℃条件下48h内运送至滁州市疾病预防控制中心流感监测网络实验室，如未能48 h内送至实验室的，应当在-70 ℃或以下保存，并保证采集的标本1周内送到流感监测网络实验室。
1.2.2 ILI暴发疫情监测方法
流感暴发疫情为1周内，在同一学校、幼儿园或其他集体单位发生15例及以上流感样病例。按照参照《全国流感监测方案（2010年版）》要求，采集10份咽拭子（低于10例，全部采集），4 ℃条件下24 h内运送至流感监测网络实验室。
1.3 实验步骤
1.3.1 病毒的RNA提取
用RNeasy Mini Kit（德国Qiagen 公司）提取咽拭子核酸，操作按试剂盒（货号：74106）说明书进行。
1.3.2 反应体系配制
按照北京金豪制药股份有限公司生产的流感病毒核酸试剂盒操作说明书配制甲型通用、H1N1（2009）、季节性H1、季节性H3、H7、乙型通用、Yamagata和Victoria流感病毒反应体系。同时做好阴阳性对照和内参对照，所用试剂均在有效期内。
1.3.3 Real-time PCR扩增
用Real-time PCR扩增仪（ABI7300，美国）扩增已提取的咽拭子核酸，操作按金豪试剂说明书进行。
1.3.4 流感病毒分离鉴定
核酸检测阳性的标本经无菌处理后接种于MDCK 细胞培养瓶，放置于35℃5%CO2培养箱培养，每日观察细胞病变情况。7d后，收获细胞培养物进行红细胞凝集试验（HA）方法进行流感病毒的鉴定。当年代表毒株抗原及参考血清为中国疾病预防控制中心病毒所国家流感中心提供。
1.4 主要仪器和设备
美国Applied Biosystems PCR仪（ABI7300），德国QIAcube全自动核酸提取仪，德国Eppendorf移液器，美国Thermo公司的CO2培养箱，青岛海尔特种电器公司的超低温冰箱，倒置显微镜为日本奥林匹斯。
1.5 统计方法
实验数据采用Excel进行统计分析。
2 结果
2.1 流感样病例监测情况。
2.1.1 流感样病例就诊百分比
2013年第l周-52周哨点医院共报告流感样病例951例，门急诊病例就诊总数144147例，流感样病例就诊百分比为0.66%。第4周（1月中旬）和第14周（4月上旬）分别有两个就诊高峰为2.17%和2.22%，之后（第15周～39周）曲线平缓，自45周（11月上旬）开始曲线呈上升趋势，见图1。
2.1.2 ILI年龄分布情况
2013年哨点医院采集的951例ILI中，0岁组716例，占75.29%；5岁组191例，占20.08%；15岁组9例，占0.95%；25岁组33例，占3.47%；60岁组2例，占0.21%。哨点医院报告的ILI主要分布在0～5岁人群中。
图1 2013年滁州市流感监测哨点医院ILI就诊百分比时间分布情况
2.2 病原学监测结果
2.2.1 流感病毒核酸检测
2013年滁州市流感网络实验室对哨点医院送检的ILI 902份标本和暴发疫情80份标本进行Real-time PCR核酸检测，共检出阳性标本148份，阳性率为15.07%。哨点医院送检的ILI阳性标本中，混合型1份，占阳性标本总数的0.68%；H1N1（2009）流感 46 份，占阳性标本总数的31.08%；季节性流感H3流感 23份，占阳性标本总数的15.54%；H7 1份，占阳性标本总数的0.68%；流感B/Y系流感 15份，占阳性标本总数的10.13%。ILI暴发疫情标本中，H1N1（2009）流感 8 份，占阳性标本总数的5.40%；季节性流感H3流感 2 份，占阳性标本总数的1.35%；流感B/Y系流感 52份，占阳性标本总数的35.14%。核酸检测阳性各标本组间差别具有统计学意义（χ2=265.19，P<0.01）。见表1。
检测时间分布为：1月H1N1（2009）流感12份、季节性H3流感2份；2月H1N1（2009）流感10份、季节性H3流感2份；3月H1N1（2009）流感14份、H7流感1份；4月H1N1（2009）流感4份、季節性H3流感2份；5月1份季节性H3流感；11月均为H1N1（2009）流感；12月H1N1（2009）流感5份、季节性H3流感19份、B/Y流感67份、混合型1份。见图2。
2.2.2 流感病毒分离结果。
2013 年应用MDCK 细胞对148 份核酸检测阳性的标本进行病毒分离，结果分离到病毒29 株，分离阳性率为15.59%，其中H1N1（2009）流感4份，H3N2 流感2 株，B/Y系流感23 株。红细胞凝集试验（HA）中，H1N1（2009）流感与B/Y系流感HA滴度均大于16，H3N2 流感HA滴度均小于8。
3 讨论
实验结果显示：2013年滁州市主要流行的H1N1（2009）流感、季节性H3流感和B/Y流感病毒。此结果与本省流感流行规律基本一致[3]。夏秋季（6月～10月份）流感病毒活动较弱，检出率很低。冬春季流感易流行，其中春季以甲型流感活跃为主，冬季乙型流感病毒活跃，在学校、幼儿园等集体单位的甚至会局部暴发。在4起暴发流感疫情中，1起为H1N1（2009）流感病毒引起，3起为B/Y系流感病毒引起。0岁组流感病毒检出率较低可能与标本采集较困难而影响标本质量有关。5岁组人群病毒核酸阳性率高的原因是4起暴发流感疫情发生在学校的1～9年级，各县区疾控中心为确认疫情而针对性采集的标本。 哨点医院采集902份标本，流感病毒阳性率为9.53%；4起暴发流感疫情采集80份标本，流感病毒阳性率为77.5%，阳性率明显高于哨点医院，应加强对哨点医院采样人员的技术培训。各年龄组中，0岁组的采样数最多，60岁组采样数最少，为全面了解滁州市流感在人群中的活动情况，建议增加成年人中流感样病例标本的采集。
2013年3月20日滁州市报告了一例人感染H7亚型流感病毒，经中国CDC确证为人感染H7N9禽流感新型重组病毒[4-5]，是安徽省首例人感染H7N9禽流感病毒，在此后的几个月内滁州市又陆续出现3例感染H7N9禽流感病例。面对如此严峻的形势，应续加强流感监测，了解流感病毒的不同亚型和流感病毒活动强度的变化趋势；加强对流感的健康干预；制定大流行期间的防控策略；提高医务人员对重症病例的救治能力。
综上所述，ILI、暴发疫情和病原学等流感监测是预防和控制流感的重要技术手段，做好监测，可对流感流行趋势及时掌握，建立流感应急机制，做好预测和预警工作，为制定滁州市流感流行的防控策略提供科学依据，对预防和控制流感流行有重要作用。
参考文献：
[1]黄祯祥.医学病毒学基础及实验技术[M].北京：北京科技出社，1990，670---675.
[2]卫生部办公厅.全国流感监测方案（2010年版）.
[3]赵志荣，姚为玲，江良梁，霍开兰，沈志斌.2010～2011年马鞍山市流感疫情监测分析[J].中国病原生物学杂志，2012，7（7）：527-530.
[4]Gao R，Cao B，Hu Y，et a1.Human infection with a Novel Avian-Origin Influenza A（H7N9）virus[J].N Engl JMed.2013，368（20）：1888-1897.
[5]Feng Y，Mao H，Xu C，et a1.Origin and characteristics of internal genes affect infectivity of the novel
avian-origin influenza A（H7N9）virus[J].PLoS One.2013，8（11）：e81136.
作者简介：张赛（1987-），男，汉族，安徽省濉溪縣人，病原生物学专业在读研究生，检验师，从事微生物检验工作。
关键词：流感；疫情；监测
Analysis of influenza etiology surveillance results in Chuzhou in 2013
ZHANG Sai1，2，LU Jun1，GUO Yanyan1，2（1.Anhui University of Science & Technology Huainan，232000，China；2.Chuzhou Center for Disease Control and Prevention，Chuzhou，239000，China）
【Abstract】 Objective To analyze the results and the prevalent trends of influenza surveillance in 2013，and provide the scientific basis for prevention and control of influenza in Chuzhou.Methods The data of ILI（Influenza-like illness）were collected from one sentinel hospital by influenza surveillance information system in 2013，and the prevalent trends were analyzed.The throat swab specimens were collected from the ILI of sentinel hospitals and outbreaks，detected by real-time RT-PCR method，of which positive samples inoculated with MDCK cells and then identified by hemagglutination（HA）test.Results In 2013，951 cases were reported as ILI from the influenza sentinel hospital，and the hospital visiting ratio was 0.66%，of which the most is the children under 5-years old.982 throat swabs were collected，and 148 cases were nucleic acid testing positive at the rate of 15.07%，including 1 strain of mixed type，54 strains of H1N1（2009），25 strains of H3，1 strain of H7 and 67 strains of B/Yamagata.29 strains influenza virus were isolated by MDCK.There were 4 ILI outbreaks reported and the main outbreak related predominant strains were different. Conclusion：In 2013，the type A（H1N1/2009）and B（Yamagata）were dominant in Chuzhou.The influenza is popular in children，can be found a peak in spring and winter.Monitoring and health interventions of influenza should be greater attention.
【Key words】 Influenza；outbreak；surveillance
流行性感冒簡称流感，是由流行性感冒病毒引起的一种常见的急性呼吸道传染病。流感病毒是RNA病毒属正黏病毒科，有3种型别，为甲（A）、乙（B）、丙（C）。流感病毒易变异，每个人都有感染的可能性，极易造成流行，是人类面临的主要公共健康问题之一，是第一个被世界卫生组织列为全球监测的传染病[1]。Real time PCR是在普通PCR的基础上发展起来的具有高灵敏度和特异性的检测技术，现已广泛应用于流感监测网络实验室。现运用Real time PCR及病毒分离培养技术对2013年滁州市的ILI进行检测。
1 材料与方法 1.1 监测对象
选择滁州市第一人民医院发热门诊、儿科、急诊的发热（腋下体温≥38℃），伴有咳嗽或咽痛之一的患者。
1.2 监测方法
1.2.1 ILI监测方法
参照《全国流感监测方案（2010年版）》[2]要求，哨点医院每周采集5～15 份发病3 d内尚未服用抗病毒药物的流感样病例咽拭子标本。标本采集后在4 ℃条件下48h内运送至滁州市疾病预防控制中心流感监测网络实验室，如未能48 h内送至实验室的，应当在-70 ℃或以下保存，并保证采集的标本1周内送到流感监测网络实验室。
1.2.2 ILI暴发疫情监测方法
流感暴发疫情为1周内，在同一学校、幼儿园或其他集体单位发生15例及以上流感样病例。按照参照《全国流感监测方案（2010年版）》要求，采集10份咽拭子（低于10例，全部采集），4 ℃条件下24 h内运送至流感监测网络实验室。
1.3 实验步骤
1.3.1 病毒的RNA提取
用RNeasy Mini Kit（德国Qiagen 公司）提取咽拭子核酸，操作按试剂盒（货号：74106）说明书进行。
1.3.2 反应体系配制
按照北京金豪制药股份有限公司生产的流感病毒核酸试剂盒操作说明书配制甲型通用、H1N1（2009）、季节性H1、季节性H3、H7、乙型通用、Yamagata和Victoria流感病毒反应体系。同时做好阴阳性对照和内参对照，所用试剂均在有效期内。
1.3.3 Real-time PCR扩增
用Real-time PCR扩增仪（ABI7300，美国）扩增已提取的咽拭子核酸，操作按金豪试剂说明书进行。
1.3.4 流感病毒分离鉴定
核酸检测阳性的标本经无菌处理后接种于MDCK 细胞培养瓶，放置于35℃5%CO2培养箱培养，每日观察细胞病变情况。7d后，收获细胞培养物进行红细胞凝集试验（HA）方法进行流感病毒的鉴定。当年代表毒株抗原及参考血清为中国疾病预防控制中心病毒所国家流感中心提供。
1.4 主要仪器和设备
美国Applied Biosystems PCR仪（ABI7300），德国QIAcube全自动核酸提取仪，德国Eppendorf移液器，美国Thermo公司的CO2培养箱，青岛海尔特种电器公司的超低温冰箱，倒置显微镜为日本奥林匹斯。
1.5 统计方法
实验数据采用Excel进行统计分析。
2 结果
2.1 流感样病例监测情况。
2.1.1 流感样病例就诊百分比
2013年第l周-52周哨点医院共报告流感样病例951例，门急诊病例就诊总数144147例，流感样病例就诊百分比为0.66%。第4周（1月中旬）和第14周（4月上旬）分别有两个就诊高峰为2.17%和2.22%，之后（第15周～39周）曲线平缓，自45周（11月上旬）开始曲线呈上升趋势，见图1。
2.1.2 ILI年龄分布情况
2013年哨点医院采集的951例ILI中，0岁组716例，占75.29%；5岁组191例，占20.08%；15岁组9例，占0.95%；25岁组33例，占3.47%；60岁组2例，占0.21%。哨点医院报告的ILI主要分布在0～5岁人群中。
图1 2013年滁州市流感监测哨点医院ILI就诊百分比时间分布情况
2.2 病原学监测结果
2.2.1 流感病毒核酸检测
2013年滁州市流感网络实验室对哨点医院送检的ILI 902份标本和暴发疫情80份标本进行Real-time PCR核酸检测，共检出阳性标本148份，阳性率为15.07%。哨点医院送检的ILI阳性标本中，混合型1份，占阳性标本总数的0.68%；H1N1（2009）流感 46 份，占阳性标本总数的31.08%；季节性流感H3流感 23份，占阳性标本总数的15.54%；H7 1份，占阳性标本总数的0.68%；流感B/Y系流感 15份，占阳性标本总数的10.13%。ILI暴发疫情标本中，H1N1（2009）流感 8 份，占阳性标本总数的5.40%；季节性流感H3流感 2 份，占阳性标本总数的1.35%；流感B/Y系流感 52份，占阳性标本总数的35.14%。核酸检测阳性各标本组间差别具有统计学意义（χ2=265.19，P<0.01）。见表1。
检测时间分布为：1月H1N1（2009）流感12份、季节性H3流感2份；2月H1N1（2009）流感10份、季节性H3流感2份；3月H1N1（2009）流感14份、H7流感1份；4月H1N1（2009）流感4份、季節性H3流感2份；5月1份季节性H3流感；11月均为H1N1（2009）流感；12月H1N1（2009）流感5份、季节性H3流感19份、B/Y流感67份、混合型1份。见图2。
2.2.2 流感病毒分离结果。
2013 年应用MDCK 细胞对148 份核酸检测阳性的标本进行病毒分离，结果分离到病毒29 株，分离阳性率为15.59%，其中H1N1（2009）流感4份，H3N2 流感2 株，B/Y系流感23 株。红细胞凝集试验（HA）中，H1N1（2009）流感与B/Y系流感HA滴度均大于16，H3N2 流感HA滴度均小于8。
3 讨论
实验结果显示：2013年滁州市主要流行的H1N1（2009）流感、季节性H3流感和B/Y流感病毒。此结果与本省流感流行规律基本一致[3]。夏秋季（6月～10月份）流感病毒活动较弱，检出率很低。冬春季流感易流行，其中春季以甲型流感活跃为主，冬季乙型流感病毒活跃，在学校、幼儿园等集体单位的甚至会局部暴发。在4起暴发流感疫情中，1起为H1N1（2009）流感病毒引起，3起为B/Y系流感病毒引起。0岁组流感病毒检出率较低可能与标本采集较困难而影响标本质量有关。5岁组人群病毒核酸阳性率高的原因是4起暴发流感疫情发生在学校的1～9年级，各县区疾控中心为确认疫情而针对性采集的标本。 哨点医院采集902份标本，流感病毒阳性率为9.53%；4起暴发流感疫情采集80份标本，流感病毒阳性率为77.5%，阳性率明显高于哨点医院，应加强对哨点医院采样人员的技术培训。各年龄组中，0岁组的采样数最多，60岁组采样数最少，为全面了解滁州市流感在人群中的活动情况，建议增加成年人中流感样病例标本的采集。
2013年3月20日滁州市报告了一例人感染H7亚型流感病毒，经中国CDC确证为人感染H7N9禽流感新型重组病毒[4-5]，是安徽省首例人感染H7N9禽流感病毒，在此后的几个月内滁州市又陆续出现3例感染H7N9禽流感病例。面对如此严峻的形势，应续加强流感监测，了解流感病毒的不同亚型和流感病毒活动强度的变化趋势；加强对流感的健康干预；制定大流行期间的防控策略；提高医务人员对重症病例的救治能力。
综上所述，ILI、暴发疫情和病原学等流感监测是预防和控制流感的重要技术手段，做好监测，可对流感流行趋势及时掌握，建立流感应急机制，做好预测和预警工作，为制定滁州市流感流行的防控策略提供科学依据，对预防和控制流感流行有重要作用。
参考文献：
[1]黄祯祥.医学病毒学基础及实验技术[M].北京：北京科技出社，1990，670---675.
[2]卫生部办公厅.全国流感监测方案（2010年版）.
[3]赵志荣，姚为玲，江良梁，霍开兰，沈志斌.2010～2011年马鞍山市流感疫情监测分析[J].中国病原生物学杂志，2012，7（7）：527-530.
[4]Gao R，Cao B，Hu Y，et a1.Human infection with a Novel Avian-Origin Influenza A（H7N9）virus[J].N Engl JMed.2013，368（20）：1888-1897.
[5]Feng Y，Mao H，Xu C，et a1.Origin and characteristics of internal genes affect infectivity of the novel
avian-origin influenza A（H7N9）virus[J].PLoS One.2013，8（11）：e81136.
作者简介：张赛（1987-），男，汉族，安徽省濉溪縣人，病原生物学专业在读研究生，检验师，从事微生物检验工作。