【摘 要】
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目的探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)沉默DNA结合蛋白dbpA基因对大肠癌细胞生物学行为的影响。方法实验分为3组：siRNA－dbpA慢病毒干扰组、非特异性序列组和空白对照组。制备siRNA－dbpA慢病毒表达载体，转染SW620后，采用RT－PCR法对细胞中dbpA mRNA表达水平进行分析，Western blot检测SW620细胞的dbpA蛋白表达水
【机 构】
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陕西省人民医院普外一科，西安 710068,陕西省人民医院腔镜中心，西安 710068,陕西省人民医院普外一科，西安 710068,陕西省人民医院普外一科，西安 710068,西安交通大学第一附属医院
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目的探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)沉默DNA结合蛋白dbpA基因对大肠癌细胞生物学行为的影响。
方法实验分为3组：siRNA－dbpA慢病毒干扰组、非特异性序列组和空白对照组。制备siRNA－dbpA慢病毒表达载体，转染SW620后，采用RT－PCR法对细胞中dbpA mRNA表达水平进行分析，Western blot检测SW620细胞的dbpA蛋白表达水平。采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化，MTT法检测细胞增殖抑制率，并检测细胞克隆形成能力。通过裸鼠移植瘤实验观察沉默dbpA后SW620细胞在体内成瘤能力。
结果siRNA－dbpA显著下调了SW620细胞中dbpA的表达，所构建的重组慢病毒有较高的基因沉默效率。siRNA－dbpA组的dbpA表达水平下调。各组的细胞凋亡率分别为26.6%±0.38%、12.54%±0.25%和4.46%±0.19%，siRNA－dbpA组高于其他两组，差异有统计学意义(F＝28.159，P<0.01)；各组的细胞增殖第5天吸光度值分别为(0.194±0.037)、(0.814±0.043)、(1.625±0.061)，siRNA－dbpA组低于其他两组，差异有统计学意义(F＝23.214，P<0.01)；细胞克隆数分别为(37±3)、(64±5)和(175±10)个，siRNA－dbpA组低于其他两组，差异有统计学意义(F＝40.254，P<0.01)。siRNA－dbpA组裸鼠移植瘤体积在14、21、35 d后与非特异性序列组和空白对照组相比差异均有统计学意义(F＝38.256、40.241、30.257，均P<0.05)。
结论以dbpA为靶标的RNA干扰能下调大肠癌细胞株SW620中的dbpA表达，显著增加细胞的凋亡，降低了细胞的增殖克隆能力。dbpA沉默后对活体肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用。
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