【摘 要】
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目的以人骨肉瘤细胞的肾上腺髓质素(ADM)为作用靶点,建立以慢病毒为载体的RNA干扰体系,以高效抑制ADM基因的表达。方法构建慢病毒载体,设计3条针对ADM基因序列的shRNA序列(sh
【机 构】
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西安交通大学第一附属医院,西安交通大学医学部基础医学院
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81702669;31300899);陕西省重点研发计划资助项目(2017SF-231);陕西省自然科学基金资助项目(2018JM7035);中央高校基本科研业务费项目(XJJ2018046);2019年陕西省大学生创新创业训练计划项目;2018年西安交通大学医学部本科开放实验项目
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目的以人骨肉瘤细胞的肾上腺髓质素(ADM)为作用靶点,建立以慢病毒为载体的RNA干扰体系,以高效抑制ADM基因的表达。方法构建慢病毒载体,设计3条针对ADM基因序列的shRNA序列(shRNA-1、2、3),靶向ADM shRNA与慢病毒载体连接后,挑选LV-ADM-shRNA阳性克隆进行PCR鉴定并测序。经测序确认寡核苷酸插入部位正确后,提取目的质粒LV-ADM-shRNA 1、2、3,在293T细胞中包装携带目的质粒的慢病毒,然后采用多孔稀释法测定慢病毒滴度。结果构建3条靶向ADM的LV-shRNA慢
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