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【摘要】 目的：对乙型肝炎病毒（HBV）在人体内的分散情况进行调查，然后讨论它和感染临床表型是否有关系。方法：对PCR进行测序，测序之前先对其进行扩增，然后分析300例乙肝病毒感染者的HBV基因型，对HBV的基因型和临床表型之间的关系用t检验法和 字2检验法分析。结果：在300例的病毒感染者中，含有B基因型的患者180例，占60%，含有C基因型的患者120例，占40%。B基因型患者年龄（29.5±9.8）岁明显高于C基因型患者（35.2±11.4）岁，差异有统计学意义（P<0.05）；在这些男女受访患者中，HBV的基因型分散情况差异无统计学意义（P>0.05）。C基因型在无症状病毒携带者的比例是31.2%，在慢性乙肝患者中比例为30.2%，明显低于肝癌患者的58.6%和肝硬化患者的60.0%，差异均有统计学意义（P<0.05）；B基因型HBeAg阳性率55.6%明显低于C基因型的71.7%，差异有统计学意义（P<0.05）；B基因型患者血清的HBV-DNA含量（5.62±0.92）log值明显低于C基因型患者的（5.98±0.76）log值，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：临床患者的身体状况和HBV的基因型有着密不可分的关系。从患者的年纪、HBeAg阳性比例和病毒水平来看，C基因型患者明显比B基因型多，因此C基因型患者的病情很可能进一步转为肝硬化，甚至是肝癌。
【关键词】 乙型肝炎病毒； 临床表型； 基因型
近些年来，专家们根据乙型肝炎病毒（HBV）S基因序列差异≥4.0%或者全基因组序列差异≥8.0，把HBV分成了8个基因型，这几年又有新的基因型I被发现。有数据说明，HBV基因型和病毒的复制、致病性、临床表现等都有很大的关系，它的特点就是按照特定的地域分布。这次研究采用的方法是先扩增PCR，然后对其进行测序，了解乙型肝炎病毒基因型怎样分布并探讨它在实际应用中的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料 搜集本院2011年1月-2012年12月的300例患者的HBV-DNA阳性血清。肝细胞癌30例，肝硬化44例，慢性乙肝感染者120例，没有症状的病毒携带者106例。受调查患者中，年龄19～69岁，平均36.5岁，男224例，女76例。诊断标准符合2000年修订的《病毒性肝炎治疗方案》。
1.2 研究方法
1.2.1 HBV基因型的鉴定 （1）核酸的提取：取血清50 μL，加入50 μL裂解液，100 ℃保温10 min，13 000 r/min离心5 min，上清即为HBV-DNA。（2）DNA的扩增：采用套式P进化树的构建并分析基因型。DNA的扩增：采用套式PCR法对病毒S基因进行扩增。外侧引物：5′-CCTCCTGCTGGTGGCTCCAGT-TC-3′（nt 22～77），5′-GGCGGCAAACCCCAAAAGACCC-3′（nt 1004～1025）；内 侧 引 物：5′-CTAG GACCCCT-GCTCGTGTTACA-3′（nt 181～203），5′-ATTACATATC-CCATGAAGTTAAG-3′（nt 870～892）。扩增条件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s共35个循环，72 ℃ 5 min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，送上海生物工程有限公司进行测序。（3）基因型鉴定：应用Mega软件中NJ法进行系统进化树的构建并分析基因型。
1.2.2 HBV-DNA HBeAg的测定 根据说明书进行。
1.3 统计学处理 采用SPSS 10.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HBV基因型的分散情况 300份血清中180份为B型，占总数的60%；120份为C型，占总数的40%。
2.2 HBV基因型和年龄及性别的关系 在女性HBV感染者里面，B型的比例是65.5%，C型的比例是34.5%；在男性感染者里面，B型的比例是59.0%，C型的比例是41%。在这些男女受访患者中，HBV的基因型分散情况差异无统计学意义（P>0.05）。C型患者的年龄（35.2±11.4）岁明显大于B型患者的（29.5±9.8）岁，差异有统计学意义（P<0.05）。
2.3 HBV基因型在不同类型的感染者中的分布情况 在不同类型的感染者中，HBV基因型的分散情况的不同有统计学意义（P<0.05）。C基因型在无症状病毒携带者的比例是31.2%，在慢性乙肝患者中比例为30.2%，明显低于肝癌患者58.6%和肝硬化患者的60.0%，差异均有统计学意义（P<0.05）。可是在CHB和ASC两组病例中，B基因型和C基因型的构成比比较差异无统计学意义，HLC和HCC两组之间B基因型和C基因型的构成比差异也没有统计学意义。
2.4 HBV基因型与HBeAg的相关性 C基因型HBeAg阳性率71.7%（86/120）明显高于B基因型HBeAg阳性率55.6%（100/180），比较差异有统计学意义（P<0.05）。
2.5 HBV的基因型和HBV-DNA含量之间的关系 B基因型血清的HBV-DNA含量（5.62±0.92）log值明显低于C基因型患者的（5.98±0.76）log值，差异有统计学意义（P<0.05）。
3 讨论
HBV基因型分布有一定的地域性，北美、欧洲还有非洲的一些国家都有A基因型的分布，主要在亚洲地区分布的基因型是B、C，分布最广的基因型是D，它主要流行于北美、中东、印度和地中海地区。非洲撒哈拉地区分布最广的是E基因，欧洲和中北美的一些地区还分布着G基因；墨西哥和中美的一些国家还发现了H基因型。我国南方以B基因型为主，北方以C基因型为主，由南向北C基因型逐渐增多，而B基因型逐渐减少。此次调查笔者用S基因直接测序法分析300名乙肝病毒感染者的HBV基因型，调查结果表明，太原地区B型HBV感染者的比例为（60.2%）剩下的为C型基因感染者。在这次调查研究过程中，未发现其他基因型的基因。 在分析不同类型的HBV感染者基因型之后发现，ASC和CHB患者C基因型的比例明显低于HCC和HLC的患者（P<0.05）；HCL和HCC两组之间均以C型为主，它们之间的BC基因型差异没有统计学意义。而在ASC和CHB中，基因型均以B型为主，B、C型差异也没有统计学意义。这和文献里报道的C基因型较B基因型更容易进一步发展成为肝癌和肝硬化的结论相符。
此次研究表明，B基因型HBeAg阳性率明显比C基因型低（P<0.05），这个结果和国内外其他学者专家的结论一致。其原因可能是B基因型易转换成HBeAg，而C基因型则不易发生转换。研究结果表明B基因型患者血清的HBV-DNA含量明显低于C基因型患者（P<0.05），这个导致C基因型患者不容易发生e系统的转换，因为它的病毒复制非常活跃。
所以，HBV基因型的分布状况与临床医学病情有着密不可分的关系。C基因型患者的病毒水平较顽固，HBeAg血症持续的时间比较长，不易发生与HBeAb的转换，且平均年龄明显高于B基因型，这就导致了C基因型患者更容易转化发展成肝癌和肝硬化。
参考文献
[1]金丽，曾玲，郑智勇.乙型肝炎病毒相关性肾炎伴大量蛋白栓3例报道并文献复习[J].临床与实验病理学杂志，2012，28（12）：1394-1396.
[2]周淑新.WONCA研究论文摘要汇编-初级保健医生治疗乙型肝炎病毒感染结果[J].中国全科医学，2012，14（15）：1734.
[3]孟忠吉，张永红，李东，等.乙型肝炎病毒对树突状细胞表型成熟和功能活化的影响[J].中西医结合肝病杂志，2011，21（5）：284-286.
[4]徐东平.乙型肝炎病毒耐药的检测方法与临床意义[J].解放军医学杂志，2010，35（6）：611-613.
[5]黄健，孙朝辉，邹军荣，等.HBV转染肝癌细胞系基因表达谱改变的研究[J].重庆医学，2011，40（11）：1052-1054.
[6]汪莉萍，韩方正，吴光辉.HBV基因型与HBeAg的表达关系及临床意义[J].临床肝胆病杂志，2011，27（5）：505-507.
[7]吴淋玲，杨丽莎，蒋冬香，等.广西桂北地区慢性HBV感染不同免疫状态与HBV基因型关系研究[J].重庆医学，2011，40（13）：1249-1251.
[8]王其亮，李旭.HBV基因型分布与慢性乙肝临床关系的研究[J].安徽医药，2010，14（7）：781-783
[9]吴林玲，杨丽莎.HBV感染免疫状态与HBV基因型关系研究思路[J].现代生物医学进展，2010，10（19）：3729-3731.
[10]林裕龙，兰萌，莫炳强，等.不同类型乙型肝炎患者基因型的分布[J].临床检验杂志，2007，25（3）：168-169.
（收稿日期：2013-04-19） （本文编辑：欧丽）
【关键词】 乙型肝炎病毒； 临床表型； 基因型
近些年来，专家们根据乙型肝炎病毒（HBV）S基因序列差异≥4.0%或者全基因组序列差异≥8.0，把HBV分成了8个基因型，这几年又有新的基因型I被发现。有数据说明，HBV基因型和病毒的复制、致病性、临床表现等都有很大的关系，它的特点就是按照特定的地域分布。这次研究采用的方法是先扩增PCR，然后对其进行测序，了解乙型肝炎病毒基因型怎样分布并探讨它在实际应用中的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料 搜集本院2011年1月-2012年12月的300例患者的HBV-DNA阳性血清。肝细胞癌30例，肝硬化44例，慢性乙肝感染者120例，没有症状的病毒携带者106例。受调查患者中，年龄19～69岁，平均36.5岁，男224例，女76例。诊断标准符合2000年修订的《病毒性肝炎治疗方案》。
1.2 研究方法
1.2.1 HBV基因型的鉴定 （1）核酸的提取：取血清50 μL，加入50 μL裂解液，100 ℃保温10 min，13 000 r/min离心5 min，上清即为HBV-DNA。（2）DNA的扩增：采用套式P进化树的构建并分析基因型。DNA的扩增：采用套式PCR法对病毒S基因进行扩增。外侧引物：5′-CCTCCTGCTGGTGGCTCCAGT-TC-3′（nt 22～77），5′-GGCGGCAAACCCCAAAAGACCC-3′（nt 1004～1025）；内 侧 引 物：5′-CTAG GACCCCT-GCTCGTGTTACA-3′（nt 181～203），5′-ATTACATATC-CCATGAAGTTAAG-3′（nt 870～892）。扩增条件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s共35个循环，72 ℃ 5 min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，送上海生物工程有限公司进行测序。（3）基因型鉴定：应用Mega软件中NJ法进行系统进化树的构建并分析基因型。
1.2.2 HBV-DNA HBeAg的测定 根据说明书进行。
1.3 统计学处理 采用SPSS 10.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HBV基因型的分散情况 300份血清中180份为B型，占总数的60%；120份为C型，占总数的40%。
2.2 HBV基因型和年龄及性别的关系 在女性HBV感染者里面，B型的比例是65.5%，C型的比例是34.5%；在男性感染者里面，B型的比例是59.0%，C型的比例是41%。在这些男女受访患者中，HBV的基因型分散情况差异无统计学意义（P>0.05）。C型患者的年龄（35.2±11.4）岁明显大于B型患者的（29.5±9.8）岁，差异有统计学意义（P<0.05）。
2.3 HBV基因型在不同类型的感染者中的分布情况 在不同类型的感染者中，HBV基因型的分散情况的不同有统计学意义（P<0.05）。C基因型在无症状病毒携带者的比例是31.2%，在慢性乙肝患者中比例为30.2%，明显低于肝癌患者58.6%和肝硬化患者的60.0%，差异均有统计学意义（P<0.05）。可是在CHB和ASC两组病例中，B基因型和C基因型的构成比比较差异无统计学意义，HLC和HCC两组之间B基因型和C基因型的构成比差异也没有统计学意义。
2.4 HBV基因型与HBeAg的相关性 C基因型HBeAg阳性率71.7%（86/120）明显高于B基因型HBeAg阳性率55.6%（100/180），比较差异有统计学意义（P<0.05）。
2.5 HBV的基因型和HBV-DNA含量之间的关系 B基因型血清的HBV-DNA含量（5.62±0.92）log值明显低于C基因型患者的（5.98±0.76）log值，差异有统计学意义（P<0.05）。
3 讨论
HBV基因型分布有一定的地域性，北美、欧洲还有非洲的一些国家都有A基因型的分布，主要在亚洲地区分布的基因型是B、C，分布最广的基因型是D，它主要流行于北美、中东、印度和地中海地区。非洲撒哈拉地区分布最广的是E基因，欧洲和中北美的一些地区还分布着G基因；墨西哥和中美的一些国家还发现了H基因型。我国南方以B基因型为主，北方以C基因型为主，由南向北C基因型逐渐增多，而B基因型逐渐减少。此次调查笔者用S基因直接测序法分析300名乙肝病毒感染者的HBV基因型，调查结果表明，太原地区B型HBV感染者的比例为（60.2%）剩下的为C型基因感染者。在这次调查研究过程中，未发现其他基因型的基因。 在分析不同类型的HBV感染者基因型之后发现，ASC和CHB患者C基因型的比例明显低于HCC和HLC的患者（P<0.05）；HCL和HCC两组之间均以C型为主，它们之间的BC基因型差异没有统计学意义。而在ASC和CHB中，基因型均以B型为主，B、C型差异也没有统计学意义。这和文献里报道的C基因型较B基因型更容易进一步发展成为肝癌和肝硬化的结论相符。
此次研究表明，B基因型HBeAg阳性率明显比C基因型低（P<0.05），这个结果和国内外其他学者专家的结论一致。其原因可能是B基因型易转换成HBeAg，而C基因型则不易发生转换。研究结果表明B基因型患者血清的HBV-DNA含量明显低于C基因型患者（P<0.05），这个导致C基因型患者不容易发生e系统的转换，因为它的病毒复制非常活跃。
所以，HBV基因型的分布状况与临床医学病情有着密不可分的关系。C基因型患者的病毒水平较顽固，HBeAg血症持续的时间比较长，不易发生与HBeAb的转换，且平均年龄明显高于B基因型，这就导致了C基因型患者更容易转化发展成肝癌和肝硬化。
参考文献
[1]金丽，曾玲，郑智勇.乙型肝炎病毒相关性肾炎伴大量蛋白栓3例报道并文献复习[J].临床与实验病理学杂志，2012，28（12）：1394-1396.
[2]周淑新.WONCA研究论文摘要汇编-初级保健医生治疗乙型肝炎病毒感染结果[J].中国全科医学，2012，14（15）：1734.
[3]孟忠吉，张永红，李东，等.乙型肝炎病毒对树突状细胞表型成熟和功能活化的影响[J].中西医结合肝病杂志，2011，21（5）：284-286.
[4]徐东平.乙型肝炎病毒耐药的检测方法与临床意义[J].解放军医学杂志，2010，35（6）：611-613.
[5]黄健，孙朝辉，邹军荣，等.HBV转染肝癌细胞系基因表达谱改变的研究[J].重庆医学，2011，40（11）：1052-1054.
[6]汪莉萍，韩方正，吴光辉.HBV基因型与HBeAg的表达关系及临床意义[J].临床肝胆病杂志，2011，27（5）：505-507.
[7]吴淋玲，杨丽莎，蒋冬香，等.广西桂北地区慢性HBV感染不同免疫状态与HBV基因型关系研究[J].重庆医学，2011，40（13）：1249-1251.
[8]王其亮，李旭.HBV基因型分布与慢性乙肝临床关系的研究[J].安徽医药，2010，14（7）：781-783
[9]吴林玲，杨丽莎.HBV感染免疫状态与HBV基因型关系研究思路[J].现代生物医学进展，2010，10（19）：3729-3731.
[10]林裕龙，兰萌，莫炳强，等.不同类型乙型肝炎患者基因型的分布[J].临床检验杂志，2007，25（3）：168-169.
（收稿日期：2013-04-19） （本文编辑：欧丽）