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摘要：目的：对 G C - M S / M S 法分析血液中唑仑类安眠镇静药物的方法进行研究。方法：用固相萃取法提取血液中的唑仑类安眠镇静药物，再用质谱对样品含量进行定性检测，对唑仑类安眠镇静药物给予 G C -M S / M S 法分析 。结果：血液中唑侖类安眠镇静药物检出浓度在0.05ug / m L -0.1 0 ug / m L范围内时 ，工作曲线线性关系良好。 回 收 率 区 间 为 8 0.5 % -90.1 % 。结论 ： G C- M S / M S 法分析尿液中唑仑类安眠镇静药物具有简单高效的优点，可用于安眠镇静类药物误服中毒或刑事案件中毒者的血液样本分析。
关键词：固相萃取； 唑仑类；尿液；安眠镇静；色谱分析
目前，麻醉抢劫、麻醉强奸等刑事案件属一种新型多发性案件，在这类案件中，常用的麻醉药物为唑仑类安眠镇静药物，特别是三唑仑 （ Triazolam）、 阿谱唑仑 （ Alprazolam）和艾司唑仑 （ Estazolam）等 。 对受害人血液 、尿液中麻醉药物或其代谢物进行检测，是用来判断他们是否服用或注射这类安眠镇静药物的直接依据，也是为查清案情及获取犯罪证据等的迫切需要 。因此，唑仑类安眠镇静类药物检验是十分重要的，文献报道的检验安眠镇静类药物方法主要为调节酸碱性后用有机溶剂或固相萃取方法提取，以气相色谱、气质联用、液相色谱和液质联用法[1-6] 进行分析，操作过程繁琐。本次研究采用气相色谱质谱联用 （ G C-M S/ M S）的方法对唑仑类安眠镇静药物进行定性、定量检测，结果表明此方法具备操作简捷、高效灵敏的优点。
1材料与方法
1.1主要仪器与试剂
PE Clarus SQ8气相色谱-质谱联用仪：美国珀金埃尔默（PerkinElmer）公司产品；Turbomass 6.0 软件；12管固相萃取装置：GC Science 公司；氮吹仪：美国PIERCE 公司；精密移液器：大龙医疗设备（上海）有限公司；固相萃取柱：① Waters 公司 Oasis HLBcartridge（3 cc/60 mg）；② varian 公司 Bond ElutC 18 （3 cc/200 mg ）；③ varian 公司 Bond Elut C 2 （3cc/200 mg ）；超声波清洗仪等。
实验用安定、三唑仑、阿谱唑仑、艾司唑仑标准品为公安部物证鉴定中心提供， 其它试剂均为分析纯；pH 6.0 磷酸盐缓冲液；空白血样来源于不含上述混合样的健康人血。
1.2检验方法
100μg/mL的标准储备液：安定、三唑仑、阿谱唑仑、艾司唑仑 、SKF 525A 各 100 mg 加入到 100 mL 容量瓶中，用乙醇定容至刻度， 配制成浓度为 1 mg/mL 的混合溶液， 再移取 10 mL 混合溶液至100 mL容量瓶中精确定容， 配制好的标准样品浓度为 100μg/mL。
血液样本处理：取血样2mL于离心管中，加100μg/ mL标准溶液250 μL和pH 6.0磷酸盐缓冲液混匀，超声振荡5 min， 10 000 r/min 离心 10 min，取上清液于试管中。
固相萃取柱活化：用5mL甲醇以1mL/min 的流速淋洗活化柱子，然后将上清液以0.5 mL/min的流速通过柱子，再将5mL蒸馏水以1 mL/min的流速过柱洗杂，通氮气干燥5min，最后用氯仿以0.5mL/min 的流速洗脱药物，收集洗脱液于试管中，氮吹仪浓缩至干，加250μL乙醇溶解，供 GC/MS 检验。
气相色谱条件：色谱柱30 m x 0.2 5m m x 0.2 5μm，弹性石英毛细柱 以He为载气，柱体温度80℃，持续2 min，升温速率为20℃/ min升温至280℃后保持18min，进样口温度280℃，进样量为 1μL，不分流。
质谱条件：离子阱温度190℃，倍增器电压1700V，扫描质量区间 40- 450 m /z，扫描模式为全扫描采集模式，扫描时3.2 m in -30 min，熔剂延时间3min，E I电子轰击源70 eV。
2结果
2.1色谱分离
对提取溶剂进行考察表明，药物和内标均显示出良好的提取效果，各 待测物质在色谱条件下分离完全，且检测不受空白血液干扰影响。
2.2定性分析
采用全离子扫描检测模式。检测分析物和内标的定量离子，根据色谱峰面积用内标工作曲线法进行定性分析。检出浓度限在0.05ug / m L -0.10 ug / m L范围内。本次研究采用p H 值为6的磷酸盐缓释液，平行操作3次，可知回收率区间为 80.5 % -90.1 %。
3讨论
本次研究结果表明，使G C- M S / M S 法对血液中唑仑类安眠镇静药物进行定性、定量测定，在pH值为6的体系中，唑仑类安眠镇静药物回收率区间为80.5 % -90.1 %。此外，离子阱串联质谱的应用 在对唑仑类安眠镇静药物进行定性 定量测定的同时还可避免干扰物的影响，缩小检验误差。所以，G C - M S/ M S 法分析血液中唑仑类安眠镇静药物具有简单高效的优点，可用于唑仑类安眠镇静药物误服中毒或刑事案件中毒者的血液样本分析。
参考文献
[1]刘畅，夏晶，胡青，等. LC/MS 法对中成药中非法添加 9种镇静催眠类化学药品检测方法的研究[J].解放军药学学报，2009，25（3）：254-256.
[2]卓先义，向平. LC-MS/MS 同时分析血液中五种巴比妥类药物[J]. 中国司法鉴定，2007（2）：17-19.
[3]陈建虎. 固相萃取/离子阱气相色谱质谱联用对血液中多种安眠药物的同时测定[J]. 分析测试学报，2010，29（6）：84-87.
[4]郭海荣，裴茂清.生物检材中巴比妥类药物固相萃取及分析方法[J]. 刑事技术，2008，（6）：16-18.
[5]陈建虎. GC-MS/MS 测定血液中巴比妥类安眠药物[J].刑事技术，2010，（5）：32-34.
[6]刘洪涛，马安德. 血中 22 种常见毒/药物的液相色谱 - 串联质谱法快速鉴定[J]. 南方医科大学学报，2009，29（8）：1665-1667.
作者简介：王玲（1984.9-），女，满族，吉林伊通，吉林省四平市公安局查支队，工程师，全日制本科，研究方向：毒物毒品检验.
崔莉（1989.05-），女 ，满族，辽宁省抚顺市，吉林省四平市公安局刑事侦查支队，职称：无 ，研究生，研究方向：毒物毒品检验.
关键词：固相萃取； 唑仑类；尿液；安眠镇静；色谱分析
目前，麻醉抢劫、麻醉强奸等刑事案件属一种新型多发性案件，在这类案件中，常用的麻醉药物为唑仑类安眠镇静药物，特别是三唑仑 （ Triazolam）、 阿谱唑仑 （ Alprazolam）和艾司唑仑 （ Estazolam）等 。 对受害人血液 、尿液中麻醉药物或其代谢物进行检测，是用来判断他们是否服用或注射这类安眠镇静药物的直接依据，也是为查清案情及获取犯罪证据等的迫切需要 。因此，唑仑类安眠镇静类药物检验是十分重要的，文献报道的检验安眠镇静类药物方法主要为调节酸碱性后用有机溶剂或固相萃取方法提取，以气相色谱、气质联用、液相色谱和液质联用法[1-6] 进行分析，操作过程繁琐。本次研究采用气相色谱质谱联用 （ G C-M S/ M S）的方法对唑仑类安眠镇静药物进行定性、定量检测，结果表明此方法具备操作简捷、高效灵敏的优点。
1材料与方法
1.1主要仪器与试剂
PE Clarus SQ8气相色谱-质谱联用仪：美国珀金埃尔默（PerkinElmer）公司产品；Turbomass 6.0 软件；12管固相萃取装置：GC Science 公司；氮吹仪：美国PIERCE 公司；精密移液器：大龙医疗设备（上海）有限公司；固相萃取柱：① Waters 公司 Oasis HLBcartridge（3 cc/60 mg）；② varian 公司 Bond ElutC 18 （3 cc/200 mg ）；③ varian 公司 Bond Elut C 2 （3cc/200 mg ）；超声波清洗仪等。
实验用安定、三唑仑、阿谱唑仑、艾司唑仑标准品为公安部物证鉴定中心提供， 其它试剂均为分析纯；pH 6.0 磷酸盐缓冲液；空白血样来源于不含上述混合样的健康人血。
1.2检验方法
100μg/mL的标准储备液：安定、三唑仑、阿谱唑仑、艾司唑仑 、SKF 525A 各 100 mg 加入到 100 mL 容量瓶中，用乙醇定容至刻度， 配制成浓度为 1 mg/mL 的混合溶液， 再移取 10 mL 混合溶液至100 mL容量瓶中精确定容， 配制好的标准样品浓度为 100μg/mL。
血液样本处理：取血样2mL于离心管中，加100μg/ mL标准溶液250 μL和pH 6.0磷酸盐缓冲液混匀，超声振荡5 min， 10 000 r/min 离心 10 min，取上清液于试管中。
固相萃取柱活化：用5mL甲醇以1mL/min 的流速淋洗活化柱子，然后将上清液以0.5 mL/min的流速通过柱子，再将5mL蒸馏水以1 mL/min的流速过柱洗杂，通氮气干燥5min，最后用氯仿以0.5mL/min 的流速洗脱药物，收集洗脱液于试管中，氮吹仪浓缩至干，加250μL乙醇溶解，供 GC/MS 检验。
气相色谱条件：色谱柱30 m x 0.2 5m m x 0.2 5μm，弹性石英毛细柱 以He为载气，柱体温度80℃，持续2 min，升温速率为20℃/ min升温至280℃后保持18min，进样口温度280℃，进样量为 1μL，不分流。
质谱条件：离子阱温度190℃，倍增器电压1700V，扫描质量区间 40- 450 m /z，扫描模式为全扫描采集模式，扫描时3.2 m in -30 min，熔剂延时间3min，E I电子轰击源70 eV。
2结果
2.1色谱分离
对提取溶剂进行考察表明，药物和内标均显示出良好的提取效果，各 待测物质在色谱条件下分离完全，且检测不受空白血液干扰影响。
2.2定性分析
采用全离子扫描检测模式。检测分析物和内标的定量离子，根据色谱峰面积用内标工作曲线法进行定性分析。检出浓度限在0.05ug / m L -0.10 ug / m L范围内。本次研究采用p H 值为6的磷酸盐缓释液，平行操作3次，可知回收率区间为 80.5 % -90.1 %。
3讨论
本次研究结果表明，使G C- M S / M S 法对血液中唑仑类安眠镇静药物进行定性、定量测定，在pH值为6的体系中，唑仑类安眠镇静药物回收率区间为80.5 % -90.1 %。此外，离子阱串联质谱的应用 在对唑仑类安眠镇静药物进行定性 定量测定的同时还可避免干扰物的影响，缩小检验误差。所以，G C - M S/ M S 法分析血液中唑仑类安眠镇静药物具有简单高效的优点，可用于唑仑类安眠镇静药物误服中毒或刑事案件中毒者的血液样本分析。
参考文献
[1]刘畅，夏晶，胡青，等. LC/MS 法对中成药中非法添加 9种镇静催眠类化学药品检测方法的研究[J].解放军药学学报，2009，25（3）：254-256.
[2]卓先义，向平. LC-MS/MS 同时分析血液中五种巴比妥类药物[J]. 中国司法鉴定，2007（2）：17-19.
[3]陈建虎. 固相萃取/离子阱气相色谱质谱联用对血液中多种安眠药物的同时测定[J]. 分析测试学报，2010，29（6）：84-87.
[4]郭海荣，裴茂清.生物检材中巴比妥类药物固相萃取及分析方法[J]. 刑事技术，2008，（6）：16-18.
[5]陈建虎. GC-MS/MS 测定血液中巴比妥类安眠药物[J].刑事技术，2010，（5）：32-34.
[6]刘洪涛，马安德. 血中 22 种常见毒/药物的液相色谱 - 串联质谱法快速鉴定[J]. 南方医科大学学报，2009，29（8）：1665-1667.
作者简介：王玲（1984.9-），女，满族，吉林伊通，吉林省四平市公安局查支队，工程师，全日制本科，研究方向：毒物毒品检验.
崔莉（1989.05-），女 ，满族，辽宁省抚顺市，吉林省四平市公安局刑事侦查支队，职称：无 ，研究生，研究方向：毒物毒品检验.