【摘 要】
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目的观察骨髓增生异常综合征(MDS)髓系原始细胞系MDS-L经不同剂量和不同时间的三氧化二砷(As2O3)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)处理后的生物学变化.方法体外培养的M
【机 构】
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上海交通大学附属第六人民医院血液科,交通大学附属第六人民医院药剂科,Department,Climcal
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目的观察骨髓增生异常综合征(MDS)髓系原始细胞系MDS-L经不同剂量和不同时间的三氧化二砷(As2O3)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)处理后的生物学变化.方法体外培养的MDS-L细胞经9种不同浓度的药物及药物组合(As2O3:1,2,5 mmol/L;TRAIL:100,300,500μg/L,As2O3l mmol/L+TRAIL 100μg/L;As2O3 2 mmol/L+TRAIL 300μg/L;As2O3 5 mmol/L+TRAIL 500μg/L)处理,在24,48和72 h后收获细胞.对未经药物处理的细胞和药物处理后收获的细胞均进行流式细胞仪检测细胞凋亡;药物处理24 h后的细胞再经体外培养18 d后作形态学观察,同时以流式细胞仪检测CD34+细胞变化,检测药物的促分化作用;RT-PCR检测p15ink4b mRNA表达;甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,Msp)检测P15ink4bDNA甲基化状态;DAB免疫酶标检测P15ink4b蛋白水平表达.结果不同的药物组合均可诱导细胞发生凋亡,药物处理48 h凋亡达高峰(约25%),72 h时仍有约9%的细胞凋亡.药物处理(尤其是As2O3+TRAIL)导致细胞明显的形态学分化,而TRAIL能显著降低CD34+细胞比率.未经处理的MDS-L细胞基本不表达P15ink4b,并伴有明显的DNA甲基化.药物处理后P15ink4b表达增强,并伴有DNA去甲基化;但免疫酶标未显示蛋白水平P15ink4b表达的变化.结论As2O3和(或)TRAIL处理能促进MDS恶性细胞凋亡,诱导细胞分化,并能通过DNA去甲基化增强原本几乎消失的抑癌基因P15ink4b表达,有进一步进行基础研究的价值和临床应用前景.
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