微小RNA介导肾癌细胞旁效应的研究

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目的 观察肾癌细胞受X射线辐射后是否可通过转移培养基的方法诱导旁效应且微小RNA(miRNA,miR)在此过程中发挥主要作用.方法 实验设对照组、照射组、照射后条件培养基提供组、无转染和脂质体(Lipo)空转条件培养基接受组,转染Dicer-siRNA和Negative-siRNA的条件培养基接受组.照射组用X射线照射肾癌细胞,培养48 h后微核试验检测细胞内微核率,培养24h后免疫荧光检测P53结合蛋白1焦点数(53BP1 foci),克隆存活实验检测细胞存活数;条件培养基提供组照射后3h后将条件培养基移到无转染组、Lipo空转组、转染Dicer-siRNA和Negative-siRNA组进行培养,同上微核试验检测细胞内微核率和免疫荧光检测53BP1foci,克隆存活实验检测细胞存活数;siRNA干扰效果用实时定量聚合酶链反应(PCR)验证.结果 实时定量PCR证明Dicer-siRNA转染组Dicer mRNA表达量为对照组的(0.36±0.03)倍.对照组细胞内微核率和53BP1 foci分别为3.7±0.3和7.9±0.4;照射组,无转染,Lipo空转和转染Negative-siRNA的条件培养基组细胞内微核率分别为(7.6±0.8)%、(5.6±0.3)%、(5.9±0.3)%、(6.0±0.5)%;53BP1foci为(17.2±0.3)、(10.1±0.6)、(10.5±0.4)、(1 1.0±0.3)个;克隆存活数为(0.45±0.07)、(0.76±0.05)、(0.70±0.03)、(0.69±0.05)个;与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);无转染,Lipo空转和转染Negative-siRNA的条件培养基组与照射组比较,微核数和53BP1foci降低,克隆存活数增高,差异有统计学意义(P<0.05);转染Dicer-siRNA的条件培养基组细胞内微核率和53BP1foci为(4.0±0.6)个和(8.1±0.1)个,克隆存活数为(0.90±0.03)个,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 肾癌细胞照射X射线后可通过转移条件培养基的方式诱导旁效应,miRNA是介导辐射诱导的旁效应的关键因素.
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