【摘 要】
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该研究旨在探索细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)分析的标准化流程,建立一种高效的EVs检测方法,为EVs功能及临床转化研究提供技术支撑.实验采用经典的超速离心法分离E
【机 构】
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浙江大学医学院公共技术平台,杭州310000;浙江大学医学院基础医学系,杭州310000
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该研究旨在探索细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)分析的标准化流程,建立一种高效的EVs检测方法,为EVs功能及临床转化研究提供技术支撑.实验采用经典的超速离心法分离EVs,借助已知直径的聚苯乙烯微球设定并优化流式检测EVs的参数,联合应用散色光信号及荧光信号对EVs进行双参数分析鉴定,最后通过电镜观察及蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)对鉴定结果进行验证.结果显示,参照纳米微球设定的条件可清楚地将100 nm颗粒信号与噪音信号分离,且微球稀释的梯度和检测到的浓度之间呈线性相关,可以对EVs进行定量分析;荧光染色结果显示,EVs呈CFSE(5,6-Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,蛋白结合染料)及FM1-43(fixable analog of FMTM 1-43 membrane stain,亲脂性染料)双阳性,占比约3％;电镜验证其形态及直径与预期相一致.该研究通过优化流式方案及双荧光参数分析鉴定探索了EVs流式检测的标准化流程,建立了高效、准确的EVs流式检测方法.
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