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目的 建立荧光定量-逆转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)测定TH细胞中IL-2 mRNA和IL-4 mRNA方法,并作临床初步应用.方法制备IL-2 cDNA和IL-4 cDNA,分别构建含有人IL-2基因和IL-4基因片段的pMD18-T质粒,克隆后作为定量阳性模板;设计和制备用于FQ-RT-PCR的引物和FAM、TAMRA标记的探针,优化实验条件,建立FQ-RT-PCR方法;用固相单抗方法从健康人、妇科良性疾患和恶性肿瘤患者以及慢性肾功能衰竭(CRF)患者PBMC中富集CD4(TH)细胞,经PMA和calcium ionophore诱导,提取总RNA,继用所建FQ-RT-PCR方法,作IL-2 mRNA和IL-4 mRNA定量测定.实验设β-actin为内控基因以监测RNA的质量.结果根据系列模板浓度的对数与CT值作直线回归建立标准曲线,线性范围为102～107copies/μl;不精密度试验显示,高值样品的批内、批间CV分别为7.8%和12.5%,低值样品的批内、批间CV分别为10.8%和19.5%;妇科恶性肿瘤患者与健康对照组和妇科良性疾患组比较,CRF患者与健康对照组比较,IL-2 mRNA表达均显著降低,IL-4 mRNA表达均显著升高(P＜0.001).结论用所建立的FQ-RT-PCR法可对TH细胞内IL-2 mRNA和IL-4 mRNA作定量测定,方法简便、敏感、准确;妇科恶性肿瘤患者和CRF患者TH细胞内IL-2 mRNA和IL-4 mRNA表达有明显的极化现象,呈TH2反应,提示恶性肿瘤患者和CRF患者TH细胞功能处于失衡状态.可通过改善和调整TH细胞的失衡提高恶性肿瘤患者的免疫监视功能和纠正CRF患者免疫紊乱。