研究抗衰老Klotho蛋白在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移、黏附能力中的作用及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。
方法采用不同浓度的Klotho蛋白(0.1、1、10 nmol/L)处理HUVEC 24 h,同时设置空白对照组、阳性对照VEGF组(10 nmol/L)和AKT信号通路抑制组(10 nmol/L Klotho蛋白+AKT抑制剂)。通过MTT方法、划痕实验、Transwell方法、细胞黏附实验分别检测Klotho蛋白对HUVEC细胞的增殖、迁移、黏附能力的影响;并通过蛋白印迹(Western blot)检测Klotho蛋白对HUVEC中VEGF表达的诱导作用。
结果MTT方法检测0.1、1、10 nmol/L Klotho蛋白组A值与空白对照组(0.59±0.03)相比,分别增加0.63±0.03、0.71±0.04、0.80±0.04,差异有统计学意义(F=9.32,P<0.05);划痕实验0.1、1、10 nmol/L Klotho蛋白组细胞迁移率与空白对照组(9.40±2.07)%相比,分别增加(12.28±0.62)%、(31.66±1.50)%、(36.69±0.79)%,差异有统计学意义(F=9.50,P<0.05);Transwell方法发现与空白对照组细胞迁移数(80.13±12.19)相比,0.1、1、10 nmol/L Klotho蛋白组增加95.88±9.54、143.13±7.83、178±12.77,差异有统计学意义(F=11.51,P<0.05);细胞黏附实验0.1、1、10 nmol/L Klotho蛋白组和空白对照组细胞的黏附数分别为59.60±5.13、78.40±7.16、114.60±5.55和49.40±6.23,差异有统计学意义(F=9.75,P<0.05);Western blot检测发现Klotho蛋白同样能够诱导VEGF表达,与空白对照组表达比值(0.35±0.08)相比,0.1、1、10 nmol/L Klotho蛋白组增加0.46±0.02、0.71±0.12、0.81±0.16,差异有统计学意义(F=8.95,P<0.05)。
结论Klotho蛋白能促进HUVEC的增殖、迁移、黏附能力,显著诱导VEGF的表达,并且其发挥功能与AKT信号通路有关。