【摘 要】
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成簇的规律间隔的短回文重复序列 (Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)系统是目前基因编
【机 构】
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华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心,广东广州 510642华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心,广东广州 510642;温氏食品集团股份有限公司,广东云浮 52740
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成簇的规律间隔的短回文重复序列 (Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)系统是目前基因编辑、基因表达研究的热点,其中靶向RNA的CRISPR/Cas 13系统的开发为RNA的干扰和编辑提供了新的方向.文中针对HEK293T细胞非同源末端连接(Nonhomologous end joining,NHEJ)通路修复关键因子Ku70和Lig4的编码序列,设计并合成CRISPR/Cas 13a、b系统相应的gRNA,检测其对ku70和lig4基因表达的影响.结果 显示,Cas13a对ku70和lig4的RNA敲减效果可以达到50％以上,Cas13b对ku70和lig4的RNA敲减效果分别达到92％和76％;同时Cas13a、b系统能将Ku70和Lig4蛋白水平分别下调至68％和53％. CRISPR/Cas13系统可有效敲减HEK293T细胞RNA和蛋白质表达,为基因功能和调控研究提供一种新的策略.
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