逆转录病毒表达载体N2A/hGM-CSF的构建及其在COS-7细胞的初步表达

来源 :中华实验和临床病毒学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hlexcuner
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用特异性核酸内切酶Bam HI剪切质粒pCD/hGM-CSF,制备人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因片段,低融点胶回收后,连接至N2A载体BglⅡ位点,转化大肠杆菌DH5a,经快提质粒进行酶切鉴定和核酸打点杂交筛选出重组质粒N2A/hGM-CSF。利用DEAE-葡聚糖介导该重组质粒转化COS-7细胞,收集48h培养上清液,免疫学和生物学活性检测表明该上清中表达产物具有天然GM-CSF的活性,而用质粒N2A转化COS-7细胞,培养上清中未检测出GM-CSF活性。

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