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在293T细胞中获得可溶性表达的1型登革病毒(DENV1)包膜(E)蛋白。
方法PCR扩增DENV1-E蛋白功能区(1～394 aa)基因并克隆到Psectag2B-Fc真核表达载体中构建表达质粒，脂质体法转染293T细胞，经2 mg/ml Zeocin筛选，免疫荧光法鉴定所获细胞克隆；Protein-G亲和层析纯化DENV1-E-Fc重组融合蛋白，间接免疫荧光和蛋白免疫印迹法鉴定蛋白的完整性和抗原性。
结果获得稳定可溶性表达重组融合蛋白的细胞克隆，蛋白产量约为25 μg/1×107个细胞，纯化得到的DENV1-E-Fc蛋白相对分子质量约90×103，该蛋白可与识别天然构象E蛋白的单克隆抗体结合，并与免疫动物血清有良好的反应性。
结论在真核细胞中成功获得可溶性表达的DENV1-E-Fc重组融合蛋白，E蛋白功能区保持完整且具备天然的构象表位和良好的抗原性，为包膜蛋白的保护性抗原表位和功能研究奠定了基础。