野生型与Pro370Leu突变型myocilin基因真核细胞表达的对比研究

来源 :中华医学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mydearsun
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目的 比较Pro370Leu突变型myocilin(mMYOC)与野生型myocilin(wMYOC)基因在真核细胞中表达的差别,了解原发性开角型青光眼(POAG)的发病机制.方法将携带有wMYOC基因的绿色荧光蛋白重组表达载体pEGFP-N3-wMYOC和携带有mMYOC基因的红色荧光蛋白重组表达载体pDsRed2-N1-mMYOC,分别及共同转染真核细胞Hela,用荧光显微镜观察蛋白表达定位情况,并用Western 印迹分析蛋白分泌情况.结果荧光显微镜观察到wMYOC蛋白和mMYOC蛋白均成功表达,都定位在细胞质中,但wMYOC蛋白分布均匀,而mMYOC蛋白呈聚集状态.共表达时,wMYOC蛋白也呈聚集状态,且与mMYOC蛋白有共定位倾向.经Western印迹分析,相应的转染细胞可分泌wMYOC蛋白,而不能分泌mMYOC蛋白;当共表达时,也没有wMYOC蛋白分泌.结论两种基因都能成功表达,都定位在细胞质;mMYOC蛋白表现为聚集倾向和分泌障碍,并且影响wMYOC蛋白的表达和分泌特性。

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目的 探索小鼠骨髓单个核细胞(BM MNCs)体外诱导分化为肝细胞的可行性及方法.方法 将四氯化碳注射的小鼠肝脏进行培养,收集上清液,用于诱导BM MNCs分化.观察细胞分化中的形态变化;在1、7、14、21 d时,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光反应检测甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白18(CK18)、CK19、肝细胞核因子3β(HNF3β)、酪胺酸胺基转移酶(TAT)和白蛋白(ALB