【摘 要】
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目的研究基因沉默整合素连接酶(ILK)对胰腺癌细胞(Panc-1)上皮向间质转化(EMT)的影响。方法对胰腺癌Panc-1细胞进行细胞培养,成功构建ILK-specific shRNA慢病毒载体后对Panc-
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目的研究基因沉默整合素连接酶(ILK)对胰腺癌细胞(Panc-1)上皮向间质转化(EMT)的影响。方法对胰腺癌Panc-1细胞进行细胞培养,成功构建ILK-specific shRNA慢病毒载体后对Panc-1细胞进行转染,荧光显微镜下观察,评估转染效率,然后通过Q-PCR及Western blot方法验证干扰基因片段的有效性,应用Transwell方法比较转染前后各组胰腺癌细胞迁移、侵袭能力,再通过WB比较各组胰腺癌细胞上皮向间质转化(EMT)标志性蛋白E-cadherin表达情况。结果siRNA-ILK慢病毒载体构建完成后对Panc-1细胞转染,通过荧光显微镜下观察可见感染效率达80%以上,RNAi靶点病毒感染的细胞组(KD)的ILK mRNA及蛋白表达明显低于空病毒组(NC)及正常细胞组(CON)(P<0.01)。siRNA慢病毒转染对Panc-1细胞迁移、侵袭实验结果显示基因沉默ILK后胰腺癌细胞的迁移能力、侵袭能力受到了明显的抑制,迁移侵袭的细胞数减少。其中KD组的迁移率比较NC组,具有明显的差异(P<0.01),而KD组的侵袭率比较NC组也有显著的差异(P<0.05)以NC组为阴性对照,以GAPDH为内参,采用Western blot检测NC、KD组细胞的E-cadherin蛋白表达情况。S实验结果表明siRNA慢病毒转染Panc-1细胞后KD组E-cadherin表达较NC组明显上调(P<0.01)。结论基因沉默ILK的胰腺癌细胞(Panc-1)后,其迁移、侵袭能力受到明显的抑制,EMT标志性蛋白E-cadherin表达也明显上调,逆转了EMT的发生。
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