【摘 要】
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目的 探究在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)调控的糖酵解对Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)和黑色素瘤
【机 构】
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230031合肥,安徽医科大学第四附属医院肾内科;230031合肥,安徽医科大学第一附属医院肾内科
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目的 探究在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)调控的糖酵解对Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)和黑色素瘤缺乏因子2(absentin melanoma 2,AIM2)介导的巨噬细胞炎症激活的影响.方法 ①收取30例DN患者的血清和肾穿刺活检标本作为DN组,20例健康人血清标本和20例癌旁正常肾组织标本作为正常(Normal)组,通过免疫组化检测糖酵解标志物PKM2、巨噬细胞标志物CD68、炎症因子TNF-α的表达变化,ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、MCP-1水平,激光共聚焦显微镜观察肾组织CD68与PKM2共表达.②选取小鼠骨髓来源巨噬细胞分组培养,通过简单随机化的方法分为甘露醇对照组、siRNA对照组、低糖对照组、高糖刺激组、高糖刺激+ PKM2 siRNA组、高糖刺激+糖酵解抑制剂组;Western blot检测各组细胞PKM2、p-EIF2AK2、EIF2AK2、NLRP3、AIM2表达,ELISA 及RT-PCR 检测各组细胞MCP-1、IL-1β、TNF-α分泌及mRNA表达,乳酸测定试剂盒及葡萄糖吸收试剂盒检测各组细胞乳酸含量和葡萄糖吸收.结果 与Normal组相比,DN患者的肾组织中PKM2表达增加(P＜0.01),巨噬细胞浸润增多及炎症因子表达增多(P＜0.01).与Control组相比,高糖可以上调巨噬细胞PKM2、p-EIF2AK2、NLRP3、AIM2蛋白表达(P＜0.01)及MCP-1、IL-1β、TNF-α mRNA的表达(P＜0.01),增加细胞上清液中MCP-1、IL-1β、TNF-α、乳酸及葡萄糖水平(P＜0.01),而PKM2 siRNA可以抑制高糖诱导的炎症.结论 高糖可以刺激巨噬细胞的糖酵解水平增加,并促进炎症小体激活及炎症因子的释放,其机制与PKM2-EIF2AK2信号通路激活有关.
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