基于2019年7月（夏）、2019年10月（秋）、2020年1月（冬）、2020年5月（春）的季节性鱼类采样数据，运用相对重要性指数（IRI）、Shannon指数和Pianka指数对南流江河口红树林潮沟主要鱼类的时空生态位宽度和重叠进行分析，结合冗余分析探讨主要鱼类间的生态位分化。结果表明：共采集到鱼类17 680尾，隶属12目23科37属45种，其中主要鱼类（IRI＞100） 10种。在主要鱼类中，时间生态位宽度值变化范围为0.46～1.78，其中嵴塘鳢最大，爪哇拟虾虎鱼最小；空间生态位宽度值变化范围为0.81～2.05，其中斑尾刺虾虎鱼最大，爪哇拟虾虎鱼最小。时空生态位宽度值达到2以上（广生态位种）的种类有6种，分别是鲻、齐氏罗非鱼、中华乌塘鳢、斑尾刺虾虎鱼、嵴塘鳢和杂食豆齿鳗。鲻与爪哇拟虾虎鱼的时间生态位重叠值最高（0.928），尾纹双边鱼与食蚊鱼的空间生态位重叠值最高（0.979），齐氏罗非鱼与斑尾刺虾虎鱼的时空生态位重叠值最高（0.822）。南流江河口红树林潮沟主要鱼类时空二维生态位有6.7%的种对显著重叠(Qik＞0.6)，表明物种时空分布差异较大，时空生态位重叠受季节变化影响较明显。另外，冗余分析揭示影响该区域主要鱼类时空生态位分化的主要因素有水温、盐度和Chl-a （P＜0.001）；其中，主要鱼类生物量分别在冬季与盐度，在春季与溶解氧、pH和Chl-a，在夏季与总有机碳、水温、Chl-a等，在秋季与总氮、浊度、总磷等呈正相关。