【摘 要】
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为了建立A型猪塞内卡谷病毒(Senecavirus A, SVA)快速诊断方法,本试验针对SVA基因组保守区域设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,并建立了快速检测SVA的TaqMan荧光定量PCR方
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学动物科技学院,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部兽用药物与诊断技术北京科学观测实验站,天津畜牧兽医研究所
【基金项目】
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农业科技创新工程项目(ASTIP-IAS15);国家重点研发项目(No.2016YFD0501003&2017YFD0502300);天津市生猪产业创新技术体系项目(ITTPRS2017003)
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为了建立A型猪塞内卡谷病毒(Senecavirus A, SVA)快速诊断方法,本试验针对SVA基因组保守区域设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,并建立了快速检测SVA的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数达0.9974。试验结果显示,该方法特异性良好,与口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒不存在交叉反应;对SVA核酸最低检测下限为3.75拷贝,而普通PCR最低检测下限为3.75×10~3拷贝。该方法批内和批间的变异系数为均小于5%,表明明该方法的重复性良好。本试验所建立的SVA TaqMan荧光定量PCR方法为检测猪水疱性疾病病原提供一种快速、灵敏的检测方法,为开展SVA流行病学调查提供了技术支持。
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