研究核心结合因子α－1(Cbfα－1)基因沉默对高磷诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)成骨样分化和钙化的影响。
方法体外原代培养大鼠VSMC。针对大鼠Cbfα－1基因设计合成4对候选小分子干扰RNA(siRNA)序列，以Lipo 2000为载体，转染体外培养的VSMC；FAM荧光标记siRNA优化转染条件。反转录(RT)－PCR检测Cbfα－1 mRNA表达，筛选有效siRNA序列。将有效siRNA序列转染VSMC，细胞分为4组：(1)正常磷组(1.3 mmol/L)；(2)高磷组(2.6 mmol/L)；(3) siRNA转染组：高磷＋ Cbfα－1－siRNA；(4)阴性转染对照组：高磷＋阴性对照siRNA。RT－PCR和Western印迹法检测Cbfα－1、骨桥蛋白(OPN)基因和蛋白表达；茜素红染色观察细胞钙盐沉积。
结果在Cbfα－1－siRNA浓度为100 nmol/L、Lipo为8 μl/孔转染条件下，转染效率约55%；筛选最佳干扰序列Cbfα－1 siRNA1952，转染24 h沉默效率可达81.8%。与高磷组相比，siRNA转染组Cbfα－1 mRNA表达在转染后24和48 h均明显低于高磷组(24 h：0.335±0.059比0.714±0.106，48 h：0.574±0.036比0.726±0.086，均P<0.01)；Cbfα－1蛋白表达在转染后48和72 h均显著低于高磷组(均P<0.01)，以48 h最明显。siRNA有效沉默Cbfα－1基因表达后，siRNA转染组OPN mRNA和蛋白的表达明显低于高磷组(均P<0.05)，且细胞钙盐沉积亦明显低于高磷组。
结论化学合成的Cbfα－1 siRNA可有效抑制VSMC Cbfα－1基因和蛋白的表达，从而抑制高磷诱导的VSMC成骨样转分化和细胞钙化。Cbfα－1可望成为CKD血管钙化治疗的靶点。