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目的
构建间隙连接蛋白43(CX43)过表达载体,并对其进行鉴定。
方法用内切酶EcoRI、XbaI双酶切含目的基因的质粒和慢病毒载体,将目的基因与酶切线性化的慢病毒载体进行连接,构建重组慢病毒表达载体pHBLV-CMVIE-IRES-ZsGreen- CX43;将构建的载体先进行酶切鉴定再对其测序分析,对测序正确的重组载体和包装质粒共同转染293FT细胞,进行病毒包装和生产,收集浓缩病毒液后在293FT细胞中测定病毒滴度,并采用实时定量聚合酶链反应(PCR)对CX43基因表达进行鉴定。
结果酶切鉴定和测序分析均证明CX43慢病毒载体构建成功,包装慢病毒,收集浓缩后滴度为1 × 108/ml,实时定量PCR鉴定CX43基因在293FT细胞的表达明显增加。
结论成功构建了稳定过表达CX43的慢病毒载体。