【摘 要】
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目的 分析SH3域结合谷氨酸富含蛋白(SH3BGR)基因在宫颈癌组织中的表达及其临床意义,研究SH3BGR蛋白对宫颈癌细胞系HeLa恶性转化、增殖和迁移能力的影响,并初步探索其调控机制
【基金项目】
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国家自然科学基金(31800148),江苏省基础研究计划(自然科学基金)青年基金(BK20180681),江苏省自然科学基金(优秀青年基金)(BK20180084)。
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目的 分析SH3域结合谷氨酸富含蛋白(SH3BGR)基因在宫颈癌组织中的表达及其临床意义,研究SH3BGR蛋白对宫颈癌细胞系HeLa恶性转化、增殖和迁移能力的影响,并初步探索其调控机制.方法 采用免疫组织化学染色方法(IHC)检测SH3BGR蛋白在宫颈癌组织中的表达.运用TCGA数据库和生物信息学相关方法分析SH3BGR表达水平与宫颈癌临床分期和患者生存率的关系.采用PCR进行SH3BGR基因的扩增,将其克隆至pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen载体,构建重组慢病毒表达质粒pHAGE-SH3BGR.将重组质粒pHAGE-SH3BGR与包膜质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2共转染入人胚肾上皮细胞HEK293T,包装重组慢病毒,运用梯度稀释法测定病毒滴度.将重组慢病毒SH3BGR感染人宫颈癌细胞系HeLa,通过Western blot验证SH3BGR蛋白的表达.采用细胞增殖实验(CCK-8)、细胞划痕实验和软琼脂克隆形成实验分别评价过表达SH3BGR对He-La细胞增殖、迁移及恶性转化能力的影响.运用小干扰RNA(siRNA)敲低人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7基因,观察SH3BGR蛋白的表达.结果 SH3BGR蛋白在宫颈癌组织中表达明显高于癌旁组织,SH3BGR高表达宫颈癌患者生存期显著短于低表达患者.慢病毒载体介导的SH3BGR蛋白的过表达可显著提高HeLa细胞的增殖、迁移和恶性转化能力.敲低HPV E6/E7可以抑制SH3BGR蛋白的水平.结论 HPV可能通过E6/E7上调SH3BGR蛋白的表达,促进宫颈癌恶性转化、增殖、迁移,SH3BGR蛋白的高表达不利于宫颈癌患者的生存.
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