【摘 要】
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小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的急性、接触性传染病,对我国的畜牧业发展造成了严重的影响,目前主要通过疫苗进行防控.为检测PPRV主要抗原蛋白血凝素(hemagglutinin,H)蛋白的免疫原性,从GenBank数据库中查找了近年来公布的H蛋白氨基酸序列,选择1条符合我国流行趋势的序列,对其基因序列进行优化合成后克隆至pET28a载体上.筛选出表达量高的Rosetta(DE3)菌株进行表达,表达产物经SDS-PAGE、West
【机 构】
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中国农业科学院生物技术研究所,北京 100081
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小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的急性、接触性传染病,对我国的畜牧业发展造成了严重的影响,目前主要通过疫苗进行防控.为检测PPRV主要抗原蛋白血凝素(hemagglutinin,H)蛋白的免疫原性,从GenBank数据库中查找了近年来公布的H蛋白氨基酸序列,选择1条符合我国流行趋势的序列,对其基因序列进行优化合成后克隆至pET28a载体上.筛选出表达量高的Rosetta(DE3)菌株进行表达,表达产物经SDS-PAGE、Western Blot及质谱分析鉴定.经镍柱亲和层析纯化出单一H蛋白,取20μg与佐剂混合后免疫小鼠,收集血清进行抗体效价检测,结果显示,血清中H蛋白抗体滴度在二免2周时达到1:6400,表明H蛋白具有较好的免疫原性.进一步对二免2周时血清进行中和抗体检测显示,小鼠血清对PPRV疫苗株具有中和效应,中和效价不超过1:40.研究结果对H蛋白用于PPRV疫苗的研发提供了理论依据.
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