【摘 要】
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目的 建立快速、准确检测血清中25-羟基维生素D3[25-hydroxyvitamin D3,25（OH）D3]、25-羟基维生素D2[25-hydroxyvitamin D2,25（OH）D2]含量的柱前衍生-稳定同位素标记-超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱的方法，并用此方法诊断维生素D缺乏症，评估人群维生素D营养状况。方法 加入同位素内标的血清样品采用乙酸乙酯-正己烷溶液（2∶1,
【机 构】
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中国疾病预防控制中心营养与健康所国家卫生健康委微量元素与营养重点实验室
【基金项目】
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科技基础资源调查专项（No.2019FY101002）；
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目的 建立快速、准确检测血清中25-羟基维生素D3[25-hydroxyvitamin D3,25（OH）D3]、25-羟基维生素D2[25-hydroxyvitamin D2,25（OH）D2]含量的柱前衍生-稳定同位素标记-超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱的方法，并用此方法诊断维生素D缺乏症，评估人群维生素D营养状况。方法 加入同位素内标的血清样品采用乙酸乙酯-正己烷溶液（2∶1,V/V）提取，离心后氮气吹干，以4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮（4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione, PTAD）作为衍生化试剂与目标化合物进行衍生化反应。反应产物采用BEH C18色谱柱（2.1 mm×50 mm, 1.7μm）进行分离，以0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱。质谱采用电喷雾正离子模式和平行反应监测对目标物进行检测，内标法定量。结果 25（OH）D3和25（OH）D2的检出限为0.01 ng/mL,定量限为0.03 ng/mL。25（OH）D2浓度的线性范围为0.5～40.0 ng/mL,25（OH）D3浓度的线性范围为2.5～200.0 ng/mL,二者在浓度范围内线性良好，相关系数（r~2）大于0.995。25（OH）D3和25（OH）D2的回收率分别为95.7%～101.3%和98.7%～108.6%,相对标准偏差分别为0.5%～4.9%和2.2%～3.4%（n=5）。测定参考物质NIST SRM 972a的Level 2血清中25（OH）D3和25（OH）D2的准确度分别为104.8%和94.9%。利用该方法检测北京市116名孕妇孕早期血清中25（OH）D3和25（OH）D2水平[M（P25,P75）]分别为25.7（20.8,32.6）ng/mL和0.8（0.4,1.1）ng/mL。结论 本方法灵敏度高、定性准确，适用于人群维生素D营养状况的评价和监测。
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