【摘 要】
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目的 探讨 β 葡萄糖醛酸苷酶 (βG)基因对人膀胱癌T2 4细胞的转染及表达的可行性。方法 采用基因工程技术构建带 βG基因的真核表达载体 ,利用脂质体介导法在体外将 βG基
【机 构】
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第四军医大学西京医院泌尿外科; 第四军医大学胞工程研究中心; 第四军医大学胞工程研究中心 710032西安; 710032西安;
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目的 探讨 β 葡萄糖醛酸苷酶 (βG)基因对人膀胱癌T2 4细胞的转染及表达的可行性。方法 采用基因工程技术构建带 βG基因的真核表达载体 ,利用脂质体介导法在体外将 βG基因导入人膀胱癌T2 4细胞 ,利用mRNA打点杂交、原位杂交、免疫组织化学、Westernbloting方法检测βG基因的转录和表达情况。 结果 成功克隆出含人 βG基因全长的真核表达载体 pcDNA3 .1 βG ,以阳离子脂质体LipofectAMINE为载体将βG基因转染T2 4细胞后 ,经 40 0mg/L的G41 8筛选后可形成抗性克隆 ;βG基因打点杂交和原位杂交结果显示转基因细胞中有 βGmRNA的高表达 ;免疫组织化学和Westernbloting证实转基因细胞中有 βG蛋白的强阳性高表达。结论 βG基因可被成功转染入人膀胱癌细胞并能有效表达
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