ssp411基因siRNA表达载体的构建与有效干扰质粒的筛选

来源 :实验动物与比较医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：tenhuanggou

【摘要】

：

目的为探索精子细胞特异表达的新基因ssp411在受精及早胚发育中的功能，设计并构建了以ssp411基因为靶点的RNA干扰表达载体siRNA-ssp411s，筛选其中对ssp411基因有显著干扰作用的

【作者】

：

华敏敏李玉华李润生施惠娟欧伶

【机构】

：

华东理工大学生物工程学院,国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室

【出处】

：

实验动物与比较医学

【发表日期】

：

2009年2期

【关键词】

：

ssp411 RNA干扰短发夹RNA 实时定量PCR ssp411 RNA interference short hairpin RNA real-ti

【基金项目】

：

国家自然科学基金（30571968）和上海市人口和计划生育委员会局管科技发展基金（05JG05009）资助

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目的为探索精子细胞特异表达的新基因ssp411在受精及早胚发育中的功能，设计并构建了以ssp411基因为靶点的RNA干扰表达载体siRNA-ssp411s，筛选其中对ssp411基因有显著干扰作用的表达质粒。方法根据已知的ssp411 mRNA序列，选择设计三条带发卡结构的核苷酸序列，克隆到含有U6启动子的载体pRNAT—U6．1中并测序分析。用脂质体转染的方法将干扰质粒与表达质粒ssp411-pDsRed共转染293T细胞，24h后，荧光倒置显微镜观察转染效率，并收集细胞，通过实时定量PCR方法检测不同

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