奥沙利铂诱导的结肠癌细胞衰老模型的特性

来源 :山西医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:breeze_86
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目的探讨奥沙利铂(OXA)诱导的结肠癌细胞衰老模型的表型及其特性。方法结肠癌细胞HCT-116及HT-29通过不同剂量的奥沙利铂处理(OXA 0,2.5,5,10μmol/L)后,观察细胞形态变化并进行β-半乳糖苷酶染色,筛选β-半乳糖苷酶表达最高的作为后续实验衰老模型。将结肠癌细胞HCT-116及HT-29分别分为未处理组(OXA 0μmol/L)和衰老模型组(OXA 2.5μmol/L),通过激光共聚焦检测衰老标志物p21、β-gal的表达水平,通过流式细胞术检测Edu表达情况,通过蛋白免疫印迹检测DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、p53及周期相关蛋白p16、CDK2的表达情况,通过qRT-PCR检测衰老相关分泌表型因子IL-6、IL-8、IL-10、CXCL10、MMP-1、MMP-3的表达。分别用0-80μmol/L奥沙利铂处理HCT-116及HT-29,然后CCK-8法检测未处理组和衰老组细胞活力。结果奥沙利铂浓度为2.5μmol/L的处理组β-半乳糖苷酶表达量最高,并出现细胞形态肿胀、直径增大的衰老细胞表征,将2.5μmol/L组作为衰老模型组。与未处理组比较,衰老模型组p21、β-gal双阳性细胞比率显著增高(HCT-116双阳性细胞比率为63.67%±2.028%,HT-29双阳性细胞比率78.33%±1.33%,P<0.001)。与未处理的结肠癌细胞相比,衰老细胞Edu阳性比例显著下降(P<0.001)。与未处理的结肠癌细胞相比,衰老细胞的γ-H2AX、p53、p21及CDK2显著升高(P<0.001)。与未处理的结肠癌细胞相比,衰老细胞衰老相关分泌表型因子IL-6、IL-8、IL-10、CXCL10、MMP-1、MMP-3的mRNA表达水平均显著提高(P<0.001)。与未处理组相比,衰老模型组同一浓度奥沙利铂处理后细胞活力显著升高(P<0.001)。结论低剂量奥沙利铂会造成结肠癌细胞DNA损伤、导致细胞周期阻滞和诱发衰老,而衰老细胞增殖能力下降且具有衰老相关分泌表型及化疗抵抗的特性。
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