严重烧伤患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体的建库及相关特征分析

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目的

建立烧伤ICU住院患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库并分析相关特征。

方法

2014、2015年,重庆市1家医院烧伤ICU住院患者创面分离出131株泛耐药鲍氏不动杆菌;2015年,广东省6家医院烧伤ICU住院患者创面分离出98株泛耐药鲍氏不动杆菌。收集前述229株菌进行如下实验。(1)分析重庆市、广东省来源菌株的多位点序列分型(MLST)。(2)采用污水共培养法选用上述菌株及两地来源污水分离噬菌体,记录分离噬菌体的数量及成功次数、失败次数。(3)根据2015年重庆市和广东省分型比例最大的菌株,选用其对应噬菌体与来源地所有菌株进行交叉感染,观察噬菌体与同型或不同型菌株交叉感染时的裂解情况并计算裂解比。(4)任取一型别噬菌体液等分为3份,通过倍比稀释法测定噬菌体的滴度。将每份噬菌体液再分为3小份,分别于-20 ℃、4 ℃、室温条件下采用LB液体培养基保存,保存1、2个月时检测噬菌体滴度,评价噬菌体的稳定性。对数据行Fisher确切概率法检验、χ2检验、单因素方差分析。

结果

(1)2014年重庆市来源的菌株以序列型368(45%,31/69)为主,2015年重庆市来源的菌株以序列型75(26%,16/62)、序列型195(24%,15/62)为主。2015年广东省来源的菌株以序列型977(46%,45/98)为主。(2)以重庆市来源的菌株为基础使用当地来源的污水分离噬菌体的效果(成功分离8次、分离失败1次、分离9株噬菌体)明显优于使用广东省来源的污水(成功分离1次、分离失败7次、分离1株噬菌体),以广东省来源的菌株为基础使用当地来源的污水分离噬菌体的效果(分离8次均成功,分离6株噬菌体)明显优于使用重庆市来源的污水(分离7次均失败,分离0株噬菌体),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。以两地来源菌株为基础使用各自来源地的污水分离噬菌体的效果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)序列型75、序列型977泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体对同型菌株的裂解比分别为13/16、8/9,均明显高于它们对不同型菌株的裂解比(分别为11/115、3/53, χ2值分别为48.23、68.46,P值均小于0.001)。(4)与保存前比较,-20 ℃、4 ℃和室温条件保存1个月噬菌体滴度降低约1个数量级,保存2个月噬菌体滴度降低约2个数量级。保存1、2个月,3种储存条件噬菌体的滴度相近(F值分别为1.29、1.07,P值均大于0.05)。

结论

本研究成功建立229株泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库。不同地域、不同时间的泛耐药鲍氏不动杆菌的MLST各异,使用与菌株同一地区来源的污水分离噬菌体的效果好,噬菌体的裂解能力与菌株MLST关系密切,可按照地域划分建立噬菌体库。此外,噬菌体在LB液体培养基中稳定性良好且对储存条件无特殊要求。

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