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摘要 为探明三七病毒病对三七生物产量和质量的影响，深入到文山、砚山、西畴3个县（市）4个乡（镇）的七园，采取随机取样法采集三年生病、健植株样本，对比分析其生物学性状、单株鲜重；采用HPLC法对比分析其三七皂苷含量，结果表明：三七病毒病对三七生物学性状、三七有效成分含量均有不同程度的影响。感病三七与健康三七相比，株高平均降低27.60%、茎粗减少5.64%、中叶长及中叶宽分别减少26.95%、17.02%；单株鲜重平均减少达48.18%，说明三七病毒病可导致三七生物产量减少。感病三七皂苷含量表现出下降趋势，其中R1减少0.15个百分点、Rg1减少1.7个百分点、Rb1减少0.3个百分点、总皂苷含量减少1.13个百分点，说明三七病毒病可导致三七质量下降。
关键词 三七；病毒病；生物学性状；单株鲜重；皂苷含量
中图分类号 S435.67 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）14-0110-02
Effects of Notoginseng Virus Disease on Yield and Quality
MA Ni WANG Yong LIU Yun-zhi SUN Yu-qin CHEN Yu-jun *
（Sanqi Research Institute of Wenshan，Wenshan University，Wenshan Yunnan 663000）
Abstract This article collected three years illness and health plant samples to analyze biological character，fresh weight per plant and notoginseng saponin content. The samples from three counties inclouded four township. The notoginseng saponin content was determined by HPLC method（High Performance Liquid Chromatography）.Results showed that the notoginseng virus disease had different level influence on the biological character，fresh weight per plant and effective ingredient content of panax notoginseng.Compared with healthy plant，illness plant height reduced by 27.60% on average，stem diameter decreased by 5.64%，and the middle period of the length and middle period of width reduced by 26.95%，17.02%， respectively.Fresh weight per plant reduced by 48.18% on average.So notoginseng biological yield could be caused decrease by notoginseng virus disease.Infected notoginseng saponin content showed a downward trend，including R1 reduced by 0.15 percentage point，Rg1 reduced by 1.7 percentage point and Rb1 reduce by 0.3 percentage point，total saponin content decreased by 1.13 percentage point，so notoginseng virus disease could lead to the decrease of the quality of the notoginseng.
King words notoginseng；virus disease；biological character；fresh weight per plant；notoginseng saponin content.
三七[Panax notoginseng（Buck.）F.H.Chen]为五加科人参属植物，是我国传统名贵中药材，具有较高的药用价值，主产于我国云南文山。近年来，随着三七的规模化种植，病毒病大面积发生[1]，已在一定程度上影响了三七生产。已有多位学者开展了三七病毒病病原的研究[2-10]、三七皱皱型病毒病与环境因子关系研究[1]、三七病毒病媒介昆虫诱集试验研究[11]、三七皱缩型病毒病发生规律研究[12]，但三七病毒病对产量和质量的影响研究尚未见报道。为此，笔者开展了相关研究，现将试验结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 三七样本采集
分别深入文山、砚山、西畴三县4个三年生三七园，采取随机抽样法，分别采集健康植株、已表现典型病毒病症状三七各10株，带回实验室待测。
1.2 三七生物学性状测定
采取尺量法，分别测量健康三七和感病三七的株高、茎粗、中叶长、中叶宽，并进行统计，计算平均值。
1.3 三七单株鲜重测定
剔除地上部分，采用上海垒固仪器有限公司生产的马头牌JYT-1架盘天平，对各点病、健三七的块根逐一称重，统计各采样点单株鲜重，计算平均值。 1.4 三七有效成分测定
1.4.1 测定材料。仪器：SHIMADZU岛津（日本）LC-20A液相色谱仪、Q250超声仪（中船七院七二六所生产）、721-分光光度计（上海第三分析仪器厂生产）。试剂：CH3CH（色谱纯）购自美国，CH3CN（色谱纯）购自美国，标准品（人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1）均购自中国药品生物制品检定所，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。样品：样品为各采集点病、健植株的主根部分，干燥至水分约为13%时，测定皂苷含量。
1.4.2 测定方法。①对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg1 0.4 mg、人参皂苷Rb1 0.4 mg、三七皂苷R1 0.1 mg的混合溶液，即得。②供试品溶液的制备：精密称取三七样品粉末约0.6 g，精密加入甲醇50 mL，称定重量，放置过夜，置80 ℃水浴上回流煮沸2 h，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜过滤即得。③色谱条件：日本岛津LC-20A液相色谱仪，C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；检测波长203 nm；柱温25 ℃；进样量10 μL；流速为1 mL/min，流动相A（乙腈）和B（水）进行梯度洗脱：0～12 min，流动性（A）19%→19%，12～60 min，流动性（A）19%→36%。
2 结果与分析
2.1 三七生物学性状
感病三七与健康三七生物学性状比较如表1所示。可以看出，各点采集的健康三七平均株高为23.45 ～32.15 cm，感病三七平均株高为14.32～28.11 cm，后者比前者株高降低0.40～17.83 cm，平均降幅达27.60%。各点采集的健康三七平均茎粗为0.63～0.69 cm，感病三七平均茎粗为0.529～0.710 cm，其中砚山江那、西畴西洒2个采集点的茎粗分别为0.699、0.710 cm，略高于健康三七，但4个采集点感病三七茎粗平均降幅仍达5.64%。
各点健康三七平均中叶长为10.75～13.14 cm，感病三七平均中叶长为6.37～10.31 cm，后者比前者减少1.28～5.29 cm，平均减幅达26.95%。各点健康三七中叶宽为3.96～4.74 cm，感病三七中叶宽为3.08～4.04 cm，感病三七比健康三七减少0.20～1.36 cm，平均减幅达17.02%。
由此可以看出，感病三七的几个生物学性状指标都有不同程度的减少，其中减幅最大的是砚山稼依点的感病三七，各项指标减幅均达15%以上。其次是文山东山采集的感病三七，除中叶长仅次于西畴西洒点样本外，其余指标均高于西畴西洒、砚山江那样本。减幅最少的是砚山江那点感病三七，但4项指标平均减幅仍达5%以上。
2.2 三七单株鲜重
感病三七与健康三七单株鲜重比较如图1所示。可以看出，各点健康三七平均单株鲜重为18.50～51.06 g，感病三七平均单株鲜重为11.57～17.00 g，感病三七比健康三七平均减少19.74 g，减幅达48.18%，其中西畴西洒点减幅高达77.34%；即使砚山江那点减幅最低，亦达8.11%；其余采集点感病三七单株鲜重减幅均超过40%。
2.3 三七皂苷含量
三七皂苷含量比较如表2所示。可以看出，健康三七R1在样品中的含量为0.83%～1.13%，平均含量0.95%；感病三七在样品中的含量为0.55%～0.94%，平均含量0.80%，后者比前者减少0.15个百分点。健康三七Rg1含量为4.58%～6.99%，平均含量5.85%；感病三七Rg1含量为4.06%～6.37%，平均含量4.15%，感病三七Rg1含量比健康三七减少1.7个百分点。健康三七Rb1含量为2.73%～4.57%，平均含量3.33%；感病三七Rb1含量为2.29%～3.80%，平均含量3.03%，感病三七Rb1含量比健康三七减少0.3个百分点。健康三七总皂苷含量为8.46%～12.51%，平均含量10.13%；感病三七总皂苷含量为7.29%～10.75%，平均含量9%，感病三七总皂苷含量比健康三七减少1.13个百分点。
从各点样品皂苷含量看，文山东山、砚山江那采集点感病三七的皂苷R1比健康三七略高0.01%～0.02%，文山东山Rb1比健康三七高0.50%，但各点总皂苷含量均低于同园健康三七，减幅为0.46%～1.76%，平均减少1.13个百分点。
3 结论与讨论
（1）三七病毒病对三七生长、三七有效成分含量均有不同程度的影响，感病三七与健康三七相比，株高平均降低27.60%、茎粗减少5.64%、中叶长及中叶宽分别减少26.95%，17.02%；单株鲜重平均减少达48.18%，说明三七病毒病可明显降低三七生物产量。由于感病后三七处于病理生长状态，三七有效成分不能正常形成，因而也随之降低，其中R1减少0.15个百分点、Rg1平均含量减少1.7个百分点、Rb1平均含量减少0.3个百分点、总皂苷平均含量减少1.13个百分点，说明感病三七质量有所下降。
（2）受三七生长环境、七园管理水平等因素的影响，不同七园所取样本间存在一定的生长差异，但相同七园病、健植株在生物性状、有效成分含量上的差异则是因病毒病的侵染而导致的。其中砚山稼依点的样本不论是生物学性状还是有效成分含量，感病三七明显低于健康三七，说明该七园病毒病的发生较之其他七园为重。
（3）该研究结果表明，病毒病对三七产量和质量的影响是显著的，原因主要是三七病毒病的发病过程是一个系统而漫长的过程，通常以隐症状态存在于三七中，以致三七种植者常常忽略了病毒病病原的危害，而当三七表现出典型的病毒病症状时，病原已对植株造成了严重伤害。目前，生产上使用带病种子（苗）、对病毒病不加防治、病健植株混合采挖、运输和收储等传统操作方法，以及现有商品化病毒病药剂数量少、防效差等因素，使得三七病毒病的危害呈扩展蔓延之势，今后在三七生产过程中应引起重视。
4 参考文献
[1] 陈昱君，王勇，杨建忠，等.三七皱缩型病毒病与环境因子的关系研究[J].现代农业科技，2014（16）：108-109.
[2] 宋丽敏.三七病毒病害病原的初步鉴定[D] 北京：中国农业大学，2005.
[3] 宋丽敏，梁文星，姜辛，等.三七上番茄花叶病毒的初步鉴定[J].云南农业大学学报，2003，18（4）：111-112.
[4] 金羽，张永江，陈燕芳，等.三七花叶症的检测与鉴定[J].中国植保导刊，2005，25（6）：10-11.
[5] 金羽.三七病毒病病原的初步研究[D].哈尔滨：东北农业大学，2005.
[6] YAN Z L，SONG L M，ZHOU T，et al.Identification and molecular chara-cterization of a new potyvirus from Panax notoginseng[J].Arch Virol，2010，155：949-957.
[7] 燕照玲，周涛，李怀方，等.三七Y病毒检测体系的初步建立[C]//中国植物病理学会2009年学术年会论文集.2009：368.
[8] 包改丽，朱静，王海宁，等.三七病毒病病原的初步鉴定[C]//中国植物病理学会2012年学术年会论文集.2012：258.
[9] 朱静.几种药用植物potyviruses的鉴定及分子变异分析[D].云南：云南农业大学，2013.
[10] 李晓静.三七病毒病病原种类鉴定及其相关病毒分子变异分析[D].云南：云南农业大学，2014.
[11] LI X J，LIU F，LI Y Y，et al.First report of Tomato yellow leaf curl China virus with Betasatellite infecting Panax notoginseng[J].Plant Dis，2014， 98：1284.
[12] 刘云芝，王勇，孙玉琴，等.三七皱缩型病毒病发生规律调查研究[J].现代农业科技，2015（14）：105.
关键词 三七；病毒病；生物学性状；单株鲜重；皂苷含量
中图分类号 S435.67 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）14-0110-02
Effects of Notoginseng Virus Disease on Yield and Quality
MA Ni WANG Yong LIU Yun-zhi SUN Yu-qin CHEN Yu-jun *
（Sanqi Research Institute of Wenshan，Wenshan University，Wenshan Yunnan 663000）
Abstract This article collected three years illness and health plant samples to analyze biological character，fresh weight per plant and notoginseng saponin content. The samples from three counties inclouded four township. The notoginseng saponin content was determined by HPLC method（High Performance Liquid Chromatography）.Results showed that the notoginseng virus disease had different level influence on the biological character，fresh weight per plant and effective ingredient content of panax notoginseng.Compared with healthy plant，illness plant height reduced by 27.60% on average，stem diameter decreased by 5.64%，and the middle period of the length and middle period of width reduced by 26.95%，17.02%， respectively.Fresh weight per plant reduced by 48.18% on average.So notoginseng biological yield could be caused decrease by notoginseng virus disease.Infected notoginseng saponin content showed a downward trend，including R1 reduced by 0.15 percentage point，Rg1 reduced by 1.7 percentage point and Rb1 reduce by 0.3 percentage point，total saponin content decreased by 1.13 percentage point，so notoginseng virus disease could lead to the decrease of the quality of the notoginseng.
King words notoginseng；virus disease；biological character；fresh weight per plant；notoginseng saponin content.
三七[Panax notoginseng（Buck.）F.H.Chen]为五加科人参属植物，是我国传统名贵中药材，具有较高的药用价值，主产于我国云南文山。近年来，随着三七的规模化种植，病毒病大面积发生[1]，已在一定程度上影响了三七生产。已有多位学者开展了三七病毒病病原的研究[2-10]、三七皱皱型病毒病与环境因子关系研究[1]、三七病毒病媒介昆虫诱集试验研究[11]、三七皱缩型病毒病发生规律研究[12]，但三七病毒病对产量和质量的影响研究尚未见报道。为此，笔者开展了相关研究，现将试验结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 三七样本采集
分别深入文山、砚山、西畴三县4个三年生三七园，采取随机抽样法，分别采集健康植株、已表现典型病毒病症状三七各10株，带回实验室待测。
1.2 三七生物学性状测定
采取尺量法，分别测量健康三七和感病三七的株高、茎粗、中叶长、中叶宽，并进行统计，计算平均值。
1.3 三七单株鲜重测定
剔除地上部分，采用上海垒固仪器有限公司生产的马头牌JYT-1架盘天平，对各点病、健三七的块根逐一称重，统计各采样点单株鲜重，计算平均值。 1.4 三七有效成分测定
1.4.1 测定材料。仪器：SHIMADZU岛津（日本）LC-20A液相色谱仪、Q250超声仪（中船七院七二六所生产）、721-分光光度计（上海第三分析仪器厂生产）。试剂：CH3CH（色谱纯）购自美国，CH3CN（色谱纯）购自美国，标准品（人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1）均购自中国药品生物制品检定所，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。样品：样品为各采集点病、健植株的主根部分，干燥至水分约为13%时，测定皂苷含量。
1.4.2 测定方法。①对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg1 0.4 mg、人参皂苷Rb1 0.4 mg、三七皂苷R1 0.1 mg的混合溶液，即得。②供试品溶液的制备：精密称取三七样品粉末约0.6 g，精密加入甲醇50 mL，称定重量，放置过夜，置80 ℃水浴上回流煮沸2 h，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜过滤即得。③色谱条件：日本岛津LC-20A液相色谱仪，C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；检测波长203 nm；柱温25 ℃；进样量10 μL；流速为1 mL/min，流动相A（乙腈）和B（水）进行梯度洗脱：0～12 min，流动性（A）19%→19%，12～60 min，流动性（A）19%→36%。
2 结果与分析
2.1 三七生物学性状
感病三七与健康三七生物学性状比较如表1所示。可以看出，各点采集的健康三七平均株高为23.45 ～32.15 cm，感病三七平均株高为14.32～28.11 cm，后者比前者株高降低0.40～17.83 cm，平均降幅达27.60%。各点采集的健康三七平均茎粗为0.63～0.69 cm，感病三七平均茎粗为0.529～0.710 cm，其中砚山江那、西畴西洒2个采集点的茎粗分别为0.699、0.710 cm，略高于健康三七，但4个采集点感病三七茎粗平均降幅仍达5.64%。
各点健康三七平均中叶长为10.75～13.14 cm，感病三七平均中叶长为6.37～10.31 cm，后者比前者减少1.28～5.29 cm，平均减幅达26.95%。各点健康三七中叶宽为3.96～4.74 cm，感病三七中叶宽为3.08～4.04 cm，感病三七比健康三七减少0.20～1.36 cm，平均减幅达17.02%。
由此可以看出，感病三七的几个生物学性状指标都有不同程度的减少，其中减幅最大的是砚山稼依点的感病三七，各项指标减幅均达15%以上。其次是文山东山采集的感病三七，除中叶长仅次于西畴西洒点样本外，其余指标均高于西畴西洒、砚山江那样本。减幅最少的是砚山江那点感病三七，但4项指标平均减幅仍达5%以上。
2.2 三七单株鲜重
感病三七与健康三七单株鲜重比较如图1所示。可以看出，各点健康三七平均单株鲜重为18.50～51.06 g，感病三七平均单株鲜重为11.57～17.00 g，感病三七比健康三七平均减少19.74 g，减幅达48.18%，其中西畴西洒点减幅高达77.34%；即使砚山江那点减幅最低，亦达8.11%；其余采集点感病三七单株鲜重减幅均超过40%。
2.3 三七皂苷含量
三七皂苷含量比较如表2所示。可以看出，健康三七R1在样品中的含量为0.83%～1.13%，平均含量0.95%；感病三七在样品中的含量为0.55%～0.94%，平均含量0.80%，后者比前者减少0.15个百分点。健康三七Rg1含量为4.58%～6.99%，平均含量5.85%；感病三七Rg1含量为4.06%～6.37%，平均含量4.15%，感病三七Rg1含量比健康三七减少1.7个百分点。健康三七Rb1含量为2.73%～4.57%，平均含量3.33%；感病三七Rb1含量为2.29%～3.80%，平均含量3.03%，感病三七Rb1含量比健康三七减少0.3个百分点。健康三七总皂苷含量为8.46%～12.51%，平均含量10.13%；感病三七总皂苷含量为7.29%～10.75%，平均含量9%，感病三七总皂苷含量比健康三七减少1.13个百分点。
从各点样品皂苷含量看，文山东山、砚山江那采集点感病三七的皂苷R1比健康三七略高0.01%～0.02%，文山东山Rb1比健康三七高0.50%，但各点总皂苷含量均低于同园健康三七，减幅为0.46%～1.76%，平均减少1.13个百分点。
3 结论与讨论
（1）三七病毒病对三七生长、三七有效成分含量均有不同程度的影响，感病三七与健康三七相比，株高平均降低27.60%、茎粗减少5.64%、中叶长及中叶宽分别减少26.95%，17.02%；单株鲜重平均减少达48.18%，说明三七病毒病可明显降低三七生物产量。由于感病后三七处于病理生长状态，三七有效成分不能正常形成，因而也随之降低，其中R1减少0.15个百分点、Rg1平均含量减少1.7个百分点、Rb1平均含量减少0.3个百分点、总皂苷平均含量减少1.13个百分点，说明感病三七质量有所下降。
（2）受三七生长环境、七园管理水平等因素的影响，不同七园所取样本间存在一定的生长差异，但相同七园病、健植株在生物性状、有效成分含量上的差异则是因病毒病的侵染而导致的。其中砚山稼依点的样本不论是生物学性状还是有效成分含量，感病三七明显低于健康三七，说明该七园病毒病的发生较之其他七园为重。
（3）该研究结果表明，病毒病对三七产量和质量的影响是显著的，原因主要是三七病毒病的发病过程是一个系统而漫长的过程，通常以隐症状态存在于三七中，以致三七种植者常常忽略了病毒病病原的危害，而当三七表现出典型的病毒病症状时，病原已对植株造成了严重伤害。目前，生产上使用带病种子（苗）、对病毒病不加防治、病健植株混合采挖、运输和收储等传统操作方法，以及现有商品化病毒病药剂数量少、防效差等因素，使得三七病毒病的危害呈扩展蔓延之势，今后在三七生产过程中应引起重视。
4 参考文献
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[5] 金羽.三七病毒病病原的初步研究[D].哈尔滨：东北农业大学，2005.
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[8] 包改丽，朱静，王海宁，等.三七病毒病病原的初步鉴定[C]//中国植物病理学会2012年学术年会论文集.2012：258.
[9] 朱静.几种药用植物potyviruses的鉴定及分子变异分析[D].云南：云南农业大学，2013.
[10] 李晓静.三七病毒病病原种类鉴定及其相关病毒分子变异分析[D].云南：云南农业大学，2014.
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