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摘要 从青岛平度、即墨、莱西3个地区的多家养殖场中分离了鸡源大肠杆菌89株，并进行了鉴定及药敏试验。结果表明，所调查地区鸡源大肠杆菌耐药性较严重，对 恩诺沙星、氨苄西林耐药最为普遍，其次是氟苯尼考、庆大霉素与环丙沙星。同时发现，调查地区大肠杆菌耐药谱广且多重耐药性严重。
关键词 大肠杆菌；鸡；耐药性；山东青岛
中图分类号 S852.61；R378.2 1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）21-0244-01
Abstract 89 strains of chicken-derived Escherichia coli were isolated from several farms in Qingdao（Pingdu，Jimo，Laixi），and identification and drug sensitivty test were carried out.The results showed that the Escherichia coli resistance of chickens in the investigation area was serious，and the resistance to enrofloxacin and ampicillin was the most common，followed by florfenicol，gentamicin and ciprofloxacin. At the same time，it was found that Escherichia coli in the investigation area had wide resistance spectrum，and the multi-drug resistance was serious.
Key words Escherichia coli；chicken；drug resistance；Qingdao Shandong
抗生素的发现为人类对抗细菌感染性疾病提供了非常有利的保障，也逐渐成为了治疗细菌相关疾病的首选药物。但是，随着抗生素的大量使用，细菌对抗生素的耐受能力也在逐渐增强。近年来，据相关报导，部分地区甚至出现了超强耐药的“超级细菌”。因此，对细菌的耐药性研究已经成了目前最为紧迫的任务，也是困扰我国畜牧兽医业发展的重要难题[1]。
大肠杆菌感染是目前集约化鸡场常见的临床疾病之一，在各地区、各养殖场的发生概率均较高[2]。同时，大肠杆菌的血清型较多、分布广泛并且具有很强的地域特征，加之大肠杆菌病具有发病率高、继发性强等特点，已经使其成为威胁养鸡业的一种重要疾病[3]。为了调查山东省青岛地区鸡源性大肠杆菌的耐药性及耐药特点，本研究在青岛莱西、平度、即墨3个地区针对2015—2016年肉雞粪便中分离的大肠杆菌进行了7种临床常用抗生素的药敏测试，分析青岛市不同地区鸡源性大肠杆菌的耐药流行病学，为抗菌药物的选择和使用提供依据和保障。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试剂及器材。培养基（麦康凯琼脂、MHA琼脂、MHB肉汤），购自北京陆桥技术股份有限公司；乙醇、甘油、PBS等，购自国药集团；氨苄西林可溶性粉、盐酸环丙沙星可溶性粉、硫酸庆大霉素可溶性粉、氟苯尼考可溶性粉、硫酸新霉素可溶性粉、盐酸多黏菌素可溶性粉、盐酸恩诺沙星可溶性粉，购自青岛天元普康生物技术有限公司。细菌/药敏分析仪（XK，四川科仪诚科技有限公司）。
1.1.2 菌株。大肠杆菌标准菌株（E.coli ATCC 25922）由本试验保存，采集于青岛平度、即墨、莱西不同养殖场的大肠杆菌89株。
1.2 试验方法
1.2.1 细菌的分离鉴定。采用无菌棉拭子于鸡直肠中蘸取采样，带回实验室后，接种麦康凯琼脂平板，于37 ℃培养箱中培养16～20 h，同时观察菌落的生长情况。挑选白色、匀润光滑、边缘整齐的单菌落挑起，然后制备菌液用于药敏检测。
1.2.2 药敏试验。①药物质控：参考CLSI标准药敏方法（CLSI4th2013）指控范围，用E.coli ATCC 25922通过微量肉汤稀释法在96孔板上进行质控。②药敏试验采用细菌/药敏分析仪，按照操作说明进行操作。
2 结果与分析
2.1 细菌的分离鉴定
通过分离鉴定，采自青岛莱西、平度、即墨等3个地区的规模化养鸡场及养殖专业户的病料共147份，经分离鉴定后得到致病性大肠杆菌菌株89株。
2.2 耐药性检测
通过试验检测鸡大肠杆菌对7种常见抗菌药的抗药性，结果发现，所取样的鸡大肠杆菌均对所检抗菌药物产生了不同程度的耐药性。其中，对恩诺沙星、氨苄西林的耐药性最高，其次为氟苯尼考、庆大霉素与环丙沙星。所调查鸡大肠杆菌耐药性最低的是硫酸新霉素与多黏菌素（表1）。
2.3 多重耐药性与交叉耐药性分析
检测发现，在3个地区所检的89株菌株中，对≥3种抗菌药物产生抗药性的有48株，多重抗药率高达53.9%（表2）。15.7%的菌株对≥5种抗菌药有耐药性，38.2%的菌株对3～4种抗菌药有耐药性。其中，属于喹诺酮类的环丙沙星耐药性最为普遍。所检测菌株对氨基糖苷类的庆大霉素及黏菌素类的多黏菌素敏感性最高。
3 结论与讨论
大肠杆菌感染会导致鸡精神不振、采食下降、呼吸困难、消瘦等临床症状，并可引起关节炎、气囊炎、脑炎甚至败血症等多种疾病，严重的还可导致鸡胚死亡，降低孵化率等[4]。随着我国养殖业规模化、工厂化、集约化的发展，抗生素的无限制使用，导致各种混合感染频发，同时继发感染大肠杆菌的概率也越来越高。大肠杆菌感染已经成为了鸡细菌性感染疾病之首[5]。經调查发现，青岛3个地区（即墨、平度、莱西）鸡源大肠杆菌对环丙沙星、氟苯尼考的抗药性较高，细菌之间的差异较小，多重抗药性的现象也比较突出。因此，养殖企业在临床选择抗菌药时最好做药敏检测，根据检测结果再合理地根据自身养殖场特点选择抗菌药物。
目前，我国大部分地区禽源大肠杆菌都存在严重的多重耐药现象。在本次调查中，调查地区鸡大肠杆菌多重耐药和交叉耐药的现象比较严重且耐药谱较广，多重耐药率达到53.9%。多重耐药性问题严重可能与以下几个因素有关：一是抗生素的无限制使用，及选药、用药时没有按照合理的程序规则[6]；二是目前市场上的兽用药质量良莠不齐，存在人为添加抗生素的现象；三是为了适应抗菌药物的作用，细菌本身也在不断地发生变异。因此，在临床用药上应合理选择药物，不能滥用且长时间低剂量使用抗生素。
总之，不同地区的鸡源大肠杆菌的耐药性存在较大差异，各地区都有相应的耐药谱，各地区甚至各养殖场应该根据自身耐药谱合理地选择抗菌药。在使用时应该注意不同抗生素的轮换使用，尽量少用耐药性高的抗菌药。同时，注意养殖场卫生条件，改善饲养管理模式，尽量减少禽类疾病的发生。
4 参考文献
[1] 李楠.养殖场空气中细菌分布及耐药性研究[D].北京：中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所，2011.
[2] 王红宁.禽呼吸道系统疾病[M].北京：中国农业出版社，2002.
[3] 邢艳苹，王瑜，杨峰，等.动物源性大肠杆菌耐药性分析[J].吉林畜牧兽医，2010，31（11）：7-10.
[4] KAPER J B，NATARO J P，MOBLEY H I.Pathogenic Escherichia coli[J].Nat Rev Microbiol，2004，2（2）：123-140.
[5] 刘远飞，曹翠萍，宁海强，等.山东省鸡大肠杆菌血清型分布及耐药性分析[J].家畜生态学报，2008，29（1）：88-90.
[6] 宿志民.泰安地区鸡源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析[D].泰安：山东农业大学，2015.
关键词 大肠杆菌；鸡；耐药性；山东青岛
中图分类号 S852.61；R378.2 1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）21-0244-01
Abstract 89 strains of chicken-derived Escherichia coli were isolated from several farms in Qingdao（Pingdu，Jimo，Laixi），and identification and drug sensitivty test were carried out.The results showed that the Escherichia coli resistance of chickens in the investigation area was serious，and the resistance to enrofloxacin and ampicillin was the most common，followed by florfenicol，gentamicin and ciprofloxacin. At the same time，it was found that Escherichia coli in the investigation area had wide resistance spectrum，and the multi-drug resistance was serious.
Key words Escherichia coli；chicken；drug resistance；Qingdao Shandong
抗生素的发现为人类对抗细菌感染性疾病提供了非常有利的保障，也逐渐成为了治疗细菌相关疾病的首选药物。但是，随着抗生素的大量使用，细菌对抗生素的耐受能力也在逐渐增强。近年来，据相关报导，部分地区甚至出现了超强耐药的“超级细菌”。因此，对细菌的耐药性研究已经成了目前最为紧迫的任务，也是困扰我国畜牧兽医业发展的重要难题[1]。
大肠杆菌感染是目前集约化鸡场常见的临床疾病之一，在各地区、各养殖场的发生概率均较高[2]。同时，大肠杆菌的血清型较多、分布广泛并且具有很强的地域特征，加之大肠杆菌病具有发病率高、继发性强等特点，已经使其成为威胁养鸡业的一种重要疾病[3]。为了调查山东省青岛地区鸡源性大肠杆菌的耐药性及耐药特点，本研究在青岛莱西、平度、即墨3个地区针对2015—2016年肉雞粪便中分离的大肠杆菌进行了7种临床常用抗生素的药敏测试，分析青岛市不同地区鸡源性大肠杆菌的耐药流行病学，为抗菌药物的选择和使用提供依据和保障。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试剂及器材。培养基（麦康凯琼脂、MHA琼脂、MHB肉汤），购自北京陆桥技术股份有限公司；乙醇、甘油、PBS等，购自国药集团；氨苄西林可溶性粉、盐酸环丙沙星可溶性粉、硫酸庆大霉素可溶性粉、氟苯尼考可溶性粉、硫酸新霉素可溶性粉、盐酸多黏菌素可溶性粉、盐酸恩诺沙星可溶性粉，购自青岛天元普康生物技术有限公司。细菌/药敏分析仪（XK，四川科仪诚科技有限公司）。
1.1.2 菌株。大肠杆菌标准菌株（E.coli ATCC 25922）由本试验保存，采集于青岛平度、即墨、莱西不同养殖场的大肠杆菌89株。
1.2 试验方法
1.2.1 细菌的分离鉴定。采用无菌棉拭子于鸡直肠中蘸取采样，带回实验室后，接种麦康凯琼脂平板，于37 ℃培养箱中培养16～20 h，同时观察菌落的生长情况。挑选白色、匀润光滑、边缘整齐的单菌落挑起，然后制备菌液用于药敏检测。
1.2.2 药敏试验。①药物质控：参考CLSI标准药敏方法（CLSI4th2013）指控范围，用E.coli ATCC 25922通过微量肉汤稀释法在96孔板上进行质控。②药敏试验采用细菌/药敏分析仪，按照操作说明进行操作。
2 结果与分析
2.1 细菌的分离鉴定
通过分离鉴定，采自青岛莱西、平度、即墨等3个地区的规模化养鸡场及养殖专业户的病料共147份，经分离鉴定后得到致病性大肠杆菌菌株89株。
2.2 耐药性检测
通过试验检测鸡大肠杆菌对7种常见抗菌药的抗药性，结果发现，所取样的鸡大肠杆菌均对所检抗菌药物产生了不同程度的耐药性。其中，对恩诺沙星、氨苄西林的耐药性最高，其次为氟苯尼考、庆大霉素与环丙沙星。所调查鸡大肠杆菌耐药性最低的是硫酸新霉素与多黏菌素（表1）。
2.3 多重耐药性与交叉耐药性分析
检测发现，在3个地区所检的89株菌株中，对≥3种抗菌药物产生抗药性的有48株，多重抗药率高达53.9%（表2）。15.7%的菌株对≥5种抗菌药有耐药性，38.2%的菌株对3～4种抗菌药有耐药性。其中，属于喹诺酮类的环丙沙星耐药性最为普遍。所检测菌株对氨基糖苷类的庆大霉素及黏菌素类的多黏菌素敏感性最高。
3 结论与讨论
大肠杆菌感染会导致鸡精神不振、采食下降、呼吸困难、消瘦等临床症状，并可引起关节炎、气囊炎、脑炎甚至败血症等多种疾病，严重的还可导致鸡胚死亡，降低孵化率等[4]。随着我国养殖业规模化、工厂化、集约化的发展，抗生素的无限制使用，导致各种混合感染频发，同时继发感染大肠杆菌的概率也越来越高。大肠杆菌感染已经成为了鸡细菌性感染疾病之首[5]。經调查发现，青岛3个地区（即墨、平度、莱西）鸡源大肠杆菌对环丙沙星、氟苯尼考的抗药性较高，细菌之间的差异较小，多重抗药性的现象也比较突出。因此，养殖企业在临床选择抗菌药时最好做药敏检测，根据检测结果再合理地根据自身养殖场特点选择抗菌药物。
目前，我国大部分地区禽源大肠杆菌都存在严重的多重耐药现象。在本次调查中，调查地区鸡大肠杆菌多重耐药和交叉耐药的现象比较严重且耐药谱较广，多重耐药率达到53.9%。多重耐药性问题严重可能与以下几个因素有关：一是抗生素的无限制使用，及选药、用药时没有按照合理的程序规则[6]；二是目前市场上的兽用药质量良莠不齐，存在人为添加抗生素的现象；三是为了适应抗菌药物的作用，细菌本身也在不断地发生变异。因此，在临床用药上应合理选择药物，不能滥用且长时间低剂量使用抗生素。
总之，不同地区的鸡源大肠杆菌的耐药性存在较大差异，各地区都有相应的耐药谱，各地区甚至各养殖场应该根据自身耐药谱合理地选择抗菌药。在使用时应该注意不同抗生素的轮换使用，尽量少用耐药性高的抗菌药。同时，注意养殖场卫生条件，改善饲养管理模式，尽量减少禽类疾病的发生。
4 参考文献
[1] 李楠.养殖场空气中细菌分布及耐药性研究[D].北京：中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所，2011.
[2] 王红宁.禽呼吸道系统疾病[M].北京：中国农业出版社，2002.
[3] 邢艳苹，王瑜，杨峰，等.动物源性大肠杆菌耐药性分析[J].吉林畜牧兽医，2010，31（11）：7-10.
[4] KAPER J B，NATARO J P，MOBLEY H I.Pathogenic Escherichia coli[J].Nat Rev Microbiol，2004，2（2）：123-140.
[5] 刘远飞，曹翠萍，宁海强，等.山东省鸡大肠杆菌血清型分布及耐药性分析[J].家畜生态学报，2008，29（1）：88-90.
[6] 宿志民.泰安地区鸡源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析[D].泰安：山东农业大学，2015.