【摘 要】
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目的 探讨甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)L-A-1株在人胚肺二倍体细胞2BS株(简称2BS细胞)上的遗传稳定性.方法 将HAV L-A-1株在2BS细胞上连续传代培养至32代,取23、24、
【机 构】
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长春生物制品研究所有限责任公司,吉林长春130012
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目的 探讨甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)L-A-1株在人胚肺二倍体细胞2BS株(简称2BS细胞)上的遗传稳定性.方法 将HAV L-A-1株在2BS细胞上连续传代培养至32代,取23、24、26、28和32代次病毒,检测抗原含量和病毒滴度.RT-PCR扩增各代病毒HAV1 ～ HAV7基因序列片段,采用DNAMAN软件进行拼接,得到全基因组核苷酸序列,分析不同代次病毒基因组核苷酸和氨基酸同源性;并与GenBank中登录的国内外主要HAV毒株进行同源性分析,同时比对VP1和VP3区氨基酸序列.各代次病毒液经腹腔免疫ICR小鼠,0.5 mL/只,于免疫后28 d,经心脏采血,分离血清,ELISA法检测血清抗体效价.结果 HAV L-A-1株23、24、26、28和32代次病毒抗原含量在10240 ～ 20480 EU/mL之间,病毒滴度为7.00～7.50 lgCCID50/mL.不同代次HAV L-A-1株病毒全基因组核苷酸和氨基酸序列同源性均为100％;与国内外主要HAV毒株的核苷酸序列同源性为91.40％～ 99.70％,氨基酸序列同源性为98.20％ ～ 99.69％,与L-A-1参考株(AF314208)核苷酸和氨基酸序列同源性最高,分别为99.70％和99.69％;与国内外主要HAV毒株VP1区有5处氨基酸不一致,VP3区有2处氨基酸不一致,与L-A-1参考株(AF314208)和H2减毒株(H2K25株)VP1和VP3区氨基酸序列完全一致.不同代次病毒液免疫ICR小鼠后阳转率均为100％,血清抗体效价在684.69 ～ 997.84 mIU/mL之间,各代病毒间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HAV L-A-1株在2BS细胞上连续传代后,具有良好的遗传稳定性.
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