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目的
观察利用RNA干扰技术特异性阻断Toll样受体2/4(TLR2/TLR4)对大鼠成骨细胞迁移及增殖的影响。
方法构建TLR2/TLR4的小干扰RNA(siRNA)，转染成骨细胞后采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测TLR2/TLR4的mRNA及蛋白的含量。采用Transwell小室法及噻唑蓝(MTT)法检测转染组和非转染组成骨细胞的迁移能力以及增殖能力，同时采用Western blot法检测各组细胞内核因子-κB(NF-κB)的含量。
结果针对TLR2及TLR4的siRNA可有效抑制其mRNA的表达，抑制率分别达到了94%及84%，同时也抑制了受体蛋白的表达，使其降低至对照组的48%及65%。当TLR2及TLR4表达受到抑制后成骨细胞的迁移能力下降至对照组的76%及59%，但细胞增殖比较差异无统计学意义(P>0.05)，同时细胞内NF-κB活性降低，细胞核内NF-κB p65的含量降至对照组的47%及75%。
结论siRNA能够有效沉默TLR2/TLR4基因的表达，减弱细胞内NF-κB的活化，抑制成骨细胞迁移，表明成骨细胞的迁移通过TLR2/TLR4及NF-κB途径。