【摘 要】
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Ⅰ型跨膜蛋白在顶复门寄生虫入侵宿主细胞过程中发挥重要作用.试验对微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_4560进行生物信息学分析,选取抗原性强的序列,采用PCR方法扩增出微小隐孢
【机 构】
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吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病研究教育部重点实验室,长春130062
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Ⅰ型跨膜蛋白在顶复门寄生虫入侵宿主细胞过程中发挥重要作用.试验对微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_4560进行生物信息学分析,选取抗原性强的序列,采用PCR方法扩增出微小隐孢子虫DNA Cgd7_4560部分基因.将该片段分别连接到pET-28a和pGEX-4T-1载体,构建重组表达质粒pET-28a-Cgd7_4560和pGEX-Cgd7_4560,并将其转化到大肠埃希氏杆菌BL21(Condon plus),IPTG诱导表达获得重组蛋白.SDS-PAGE和Western blot分析,His标签重组蛋白为31 ku,GST标签重组蛋白为53 ku.用His标签重组蛋白免疫家兔,间接ELISA方法检测血清抗体效价达到1:16000,成功制备多克隆抗体.采用Western blot方法验证该抗体能够特异性的识别虫体天然蛋白,间接免疫荧光分析该蛋白在子孢子头端,间接ELISA结果表明GST-Cgd7_4560能与HCT-8细胞黏附,为其功能研究奠定了基础.
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