【摘 要】
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目的 构建含有人髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,MCLl)和绿色荧光蛋白基因(pEGFP)的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础.方法 应用基因重组技术和限
【机 构】
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解放军总医院耳鼻咽喉科研究所,北京,100853解放军第二炮兵总医院口腔科,北京,100088;解放军总医院呼吸科,北京,100853;美国纽约州立布法罗大学听力及聋病研究中心,NY 14214 US
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目的 构建含有人髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,MCLl)和绿色荧光蛋白基因(pEGFP)的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础.方法 应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-MCL1真核表达质粒.经脂质体介导转染293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-MCL1真核表达质粒在293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription polymerasechain reaction,RT-PCR)检测MCL1 mRNA的表达,Western Blot(蛋白质印迹)方法 检测MCL1蛋白的表达.结果 阳性重组子经酶切鉴定含有MCL1基因片段,基因测序结果 与GenBank中MCL1序列相同.重组pEGFP-MCL1真核表达质粒转入293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出MCL1的条带,Western Blot检测出40kDa大小的蛋白.结论 成功地构建了含有人全长MCL1基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物293细胞系中表达.
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